细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2005年
3期
342-346
,共5页
董红霖%邢金良%安家泽%杨向民%姚西英%窦科峰%陈志南
董紅霖%邢金良%安傢澤%楊嚮民%姚西英%竇科峰%陳誌南
동홍림%형금량%안가택%양향민%요서영%두과봉%진지남
肝癌%单克隆抗体%cFab%毕赤酵母%分泌表达
肝癌%單剋隆抗體%cFab%畢赤酵母%分泌錶達
간암%단극륭항체%cFab%필적효모%분비표체
目的:通过分步整合,用巴氏毕赤酵母表达抗人肝癌单克隆抗体(mAb)HAb18的嵌合Fab(cFab)片段.方法:将抗人肝癌mAb cFab/HAb18基因的原核表达载体pET32a/cFab中的CL和Fd段基因,分别亚克隆到酵母表达载体pPIC9K和pPICZαA中,构建重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd并测序鉴定.将重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd分步整合到酵母菌GS115的染色体上,经G418和Zeocin筛选高拷贝的转化子及鉴定Mut表型后,用含5mL/L甲醇的培养基诱导表达.结果:成功地表达抗人肝癌mAb HAb18的cFab,表达水平为26mg/L.Western blot鉴定证实,表达产物具有良好的与HAb18结合的活性和特异性.结论:cFab/HAb18在巴氏毕赤酵母获得表达,为对其进一步大规模的生产和临床应用奠定了基础.
目的:通過分步整閤,用巴氏畢赤酵母錶達抗人肝癌單剋隆抗體(mAb)HAb18的嵌閤Fab(cFab)片段.方法:將抗人肝癌mAb cFab/HAb18基因的原覈錶達載體pET32a/cFab中的CL和Fd段基因,分彆亞剋隆到酵母錶達載體pPIC9K和pPICZαA中,構建重組質粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd併測序鑒定.將重組質粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd分步整閤到酵母菌GS115的染色體上,經G418和Zeocin篩選高拷貝的轉化子及鑒定Mut錶型後,用含5mL/L甲醇的培養基誘導錶達.結果:成功地錶達抗人肝癌mAb HAb18的cFab,錶達水平為26mg/L.Western blot鑒定證實,錶達產物具有良好的與HAb18結閤的活性和特異性.結論:cFab/HAb18在巴氏畢赤酵母穫得錶達,為對其進一步大規模的生產和臨床應用奠定瞭基礎.
목적:통과분보정합,용파씨필적효모표체항인간암단극륭항체(mAb)HAb18적감합Fab(cFab)편단.방법:장항인간암mAb cFab/HAb18기인적원핵표체재체pET32a/cFab중적CL화Fd단기인,분별아극륭도효모표체재체pPIC9K화pPICZαA중,구건중조질립pPIC9K/CL화pPICZαA/Fd병측서감정.장중조질립pPIC9K/CL화pPICZαA/Fd분보정합도효모균GS115적염색체상,경G418화Zeocin사선고고패적전화자급감정Mut표형후,용함5mL/L갑순적배양기유도표체.결과:성공지표체항인간암mAb HAb18적cFab,표체수평위26mg/L.Western blot감정증실,표체산물구유량호적여HAb18결합적활성화특이성.결론:cFab/HAb18재파씨필적효모획득표체,위대기진일보대규모적생산화림상응용전정료기출.
