CAJ | 학술논문

[目的]利用昆虫细胞Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达血小板源性生长因子受体β (PDGFRβ)链膜外区与人IgG Fc片段的可溶性受体融合蛋白sPDGFRβ/Fc,并检测重组蛋白的特异性和生物活性.[方法]采用Bac-to-Bac系统,构建重组转移质粒pFastbac-sPDGFRβ/Fc,转化到含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,使目的基因与杆状病毒基因组DNA发生位点特异性重组,获得重组病毒DNA,将其通过脂质体转染昆虫细胞Sf9获得重组病毒.将该重组病毒感染Sf9无血清细胞系,在Sf9细胞中表达sPDGFRβ/Fc,对表达产物进行Western blotting检测和Protein A亲合层析纯化,并进一步通过MTT法检测获得的重组蛋白生物学活性.[结果]重组病毒感染Sf9细胞后,经Western blotting分析,能检测到一条分子量约为97 kDa的特异性条带,与目的蛋白大小相符.通过Protein A亲和层析,获得了纯度达75%以上,表达量为1 μg/mL细胞培养上清的重组融合蛋白,MTT结果显示该重组融合蛋白sPDGFRβ/Fc具有抑制PDGF刺激的Balb/c 3T3细胞增殖的能力.[结论]具有生物活性的重组可溶性受体融合蛋白sPDGFRβ/Fc可在昆虫细胞中成功地得到表达.
[목적]이용곤충세포Bac-to-Bac간상병독표체계통표체혈소판원성생장인자수체β (PDGFRβ)련막외구여인IgG Fc편단적가용성수체융합단백sPDGFRβ/Fc,병검측중조단백적특이성화생물활성.[방법]채용Bac-to-Bac계통,구건중조전이질립pFastbac-sPDGFRβ/Fc,전화도함천사재체Bacmid적감수태세포DH10Bac중,사목적기인여간상병독기인조DNA발생위점특이성중조,획득중조병독DNA,장기통과지질체전염곤충세포Sf9획득중조병독.장해중조병독감염Sf9무혈청세포계,재Sf9세포중표체sPDGFRβ/Fc,대표체산물진행Western blotting검측화Protein A친합층석순화,병진일보통과MTT법검측획득적중조단백생물학활성.[결과]중조병독감염Sf9세포후,경Western blotting분석,능검측도일조분자량약위97 kDa적특이성조대,여목적단백대소상부.통과Protein A친화층석,획득료순도체75%이상,표체량위1 μg/mL세포배양상청적중조융합단백,MTT결과현시해중조융합단백sPDGFRβ/Fc구유억제PDGF자격적Balb/c 3T3세포증식적능력.[결론]구유생물활성적중조가용성수체융합단백sPDGFRβ/Fc가재곤충세포중성공지득도표체.