中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2011年
1期
8-11
,共4页
小细胞肺癌%ABCE1基因%siRNA
小細胞肺癌%ABCE1基因%siRNA
소세포폐암%ABCE1기인%siRNA
目的 构建携带绿色荧光蛋白的ABCE1基因的siRNA表达载体,通过将载体转染入小细胞肺癌细胞株NCI-H446,筛选稳定转染细胞株.方法 根据ABCE1的DNA序列设计3对siRNA引物,构建可用于筛选阳性克隆且带有绿色荧光的ABCE1基因siRNA表达载体ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA-1、ABCE1-PRNAT-U6.1/Neo-siRNA-2及ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA-N,采用FUGENE-HD法将载体转染入NCI-H446细胞中,并以G418进行阳性克隆筛选,筛选ABCE1基因沉默的稳定转染细胞系.结果 经酶切和DNA测序验证,证实ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA表达栽体构建成功.将ABCE1基因siRNA表达载体成功转染小细胞肺癌细胞NC1-H446后,小细胞肺癌细胞内可见绿色荧光,通过G418筛选,获得了ABCE1基因沉默的小细胞肺癌细胞系.该细胞系的ABCEl水平明显低于未转染siRNA的小细胞肺癌细胞.结论 成功的构建了ABCE1基因siRNA表达载体ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA.筛选出ABCE1基因沉默的稳定转染小细胞肺癌细胞系,为今后应用ABCE1基因siRNA表达载体研究ABCE1基因的作用机制提供实验基础.
目的 構建攜帶綠色熒光蛋白的ABCE1基因的siRNA錶達載體,通過將載體轉染入小細胞肺癌細胞株NCI-H446,篩選穩定轉染細胞株.方法 根據ABCE1的DNA序列設計3對siRNA引物,構建可用于篩選暘性剋隆且帶有綠色熒光的ABCE1基因siRNA錶達載體ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA-1、ABCE1-PRNAT-U6.1/Neo-siRNA-2及ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA-N,採用FUGENE-HD法將載體轉染入NCI-H446細胞中,併以G418進行暘性剋隆篩選,篩選ABCE1基因沉默的穩定轉染細胞繫.結果 經酶切和DNA測序驗證,證實ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA錶達栽體構建成功.將ABCE1基因siRNA錶達載體成功轉染小細胞肺癌細胞NC1-H446後,小細胞肺癌細胞內可見綠色熒光,通過G418篩選,穫得瞭ABCE1基因沉默的小細胞肺癌細胞繫.該細胞繫的ABCEl水平明顯低于未轉染siRNA的小細胞肺癌細胞.結論 成功的構建瞭ABCE1基因siRNA錶達載體ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA.篩選齣ABCE1基因沉默的穩定轉染小細胞肺癌細胞繫,為今後應用ABCE1基因siRNA錶達載體研究ABCE1基因的作用機製提供實驗基礎.
목적 구건휴대록색형광단백적ABCE1기인적siRNA표체재체,통과장재체전염입소세포폐암세포주NCI-H446,사선은정전염세포주.방법 근거ABCE1적DNA서렬설계3대siRNA인물,구건가용우사선양성극륭차대유록색형광적ABCE1기인siRNA표체재체ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA-1、ABCE1-PRNAT-U6.1/Neo-siRNA-2급ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA-N,채용FUGENE-HD법장재체전염입NCI-H446세포중,병이G418진행양성극륭사선,사선ABCE1기인침묵적은정전염세포계.결과 경매절화DNA측서험증,증실ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA표체재체구건성공.장ABCE1기인siRNA표체재체성공전염소세포폐암세포NC1-H446후,소세포폐암세포내가견록색형광,통과G418사선,획득료ABCE1기인침묵적소세포폐암세포계.해세포계적ABCEl수평명현저우미전염siRNA적소세포폐암세포.결론 성공적구건료ABCE1기인siRNA표체재체ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA.사선출ABCE1기인침묵적은정전염소세포폐암세포계,위금후응용ABCE1기인siRNA표체재체연구ABCE1기인적작용궤제제공실험기출.
