中华医学遗传学杂志
中華醫學遺傳學雜誌
중화의학유전학잡지
CHINESE JOURNAL OF MEDICAL GENETICS
2008年
1期
40-44
,共5页
林丹%龚秀丽%李伟%郭歆冰%朱怡文%黄英
林丹%龔秀麗%李偉%郭歆冰%硃怡文%黃英
림단%공수려%리위%곽흠빙%주이문%황영
转基因小鼠%整合位点%双色荧光原位杂交%染色体定位
轉基因小鼠%整閤位點%雙色熒光原位雜交%染色體定位
전기인소서%정합위점%쌍색형광원위잡교%염색체정위
目的 建立一种高度灵敏、特异的双色荧光原位杂交(dual-color fluorescence in situ hybridization,D-FISH)技术,对两种双阳性转基因小鼠外源基因进行整合位点的染色体定位.方法 对一只整合单纯疱疹病毒胸苷嘧啶激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-tk)/增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,eGFP)的转基因小鼠以及两只整合RNA干扰载体(RNA interference,RNAi)的β654地中海贫血模型小鼠进行实验,脾脏细胞经培养后获得中期分裂相标本片,各加入适量生物素、地高辛标记探针混合液杂交,分别用罗丹明红色荧光抗体及FFIE绿色荧光抗体进行D-FISH检测.结果 两种转基因小鼠均能在同一个分裂相上同时检测到双色荧光信号.其中,HSV-tk/eGFP双阳性小鼠的分裂相上出现较强的绿色HSV-tk信号和红色eGFP信号,分别定位于染色体2E5-G3及8A2-A4;β654/RNAi双阳性小鼠检测到红色β654荧光信号及绿色RNAi荧光信号.经定位分析,β654均整合在染色体7D3-E2,RNAi病毒载体则是随机整合,其中一只鼠主要整合在1281位点,而另一只鼠主要整合在染色体1E2.3-1F、3A3两个位点.结论 用自行制备的DNA探针建立了高度灵敏、特异的D-FISH技术,同时结合G显带对双阳性转基因小鼠进行染色体基因定位.该技术平台的建立对于转基因动物和基因治疗动物模型的研究具有非常重要的意义.
目的 建立一種高度靈敏、特異的雙色熒光原位雜交(dual-color fluorescence in situ hybridization,D-FISH)技術,對兩種雙暘性轉基因小鼠外源基因進行整閤位點的染色體定位.方法 對一隻整閤單純皰疹病毒胸苷嘧啶激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-tk)/增彊型綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescence protein,eGFP)的轉基因小鼠以及兩隻整閤RNA榦擾載體(RNA interference,RNAi)的β654地中海貧血模型小鼠進行實驗,脾髒細胞經培養後穫得中期分裂相標本片,各加入適量生物素、地高辛標記探針混閤液雜交,分彆用囉丹明紅色熒光抗體及FFIE綠色熒光抗體進行D-FISH檢測.結果 兩種轉基因小鼠均能在同一箇分裂相上同時檢測到雙色熒光信號.其中,HSV-tk/eGFP雙暘性小鼠的分裂相上齣現較彊的綠色HSV-tk信號和紅色eGFP信號,分彆定位于染色體2E5-G3及8A2-A4;β654/RNAi雙暘性小鼠檢測到紅色β654熒光信號及綠色RNAi熒光信號.經定位分析,β654均整閤在染色體7D3-E2,RNAi病毒載體則是隨機整閤,其中一隻鼠主要整閤在1281位點,而另一隻鼠主要整閤在染色體1E2.3-1F、3A3兩箇位點.結論 用自行製備的DNA探針建立瞭高度靈敏、特異的D-FISH技術,同時結閤G顯帶對雙暘性轉基因小鼠進行染色體基因定位.該技術平檯的建立對于轉基因動物和基因治療動物模型的研究具有非常重要的意義.
목적 건립일충고도령민、특이적쌍색형광원위잡교(dual-color fluorescence in situ hybridization,D-FISH)기술,대량충쌍양성전기인소서외원기인진행정합위점적염색체정위.방법 대일지정합단순포진병독흉감밀정격매(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-tk)/증강형록색형광단백(enhanced green fluorescence protein,eGFP)적전기인소서이급량지정합RNA간우재체(RNA interference,RNAi)적β654지중해빈혈모형소서진행실험,비장세포경배양후획득중기분렬상표본편,각가입괄량생물소、지고신표기탐침혼합액잡교,분별용라단명홍색형광항체급FFIE록색형광항체진행D-FISH검측.결과 량충전기인소서균능재동일개분렬상상동시검측도쌍색형광신호.기중,HSV-tk/eGFP쌍양성소서적분렬상상출현교강적록색HSV-tk신호화홍색eGFP신호,분별정위우염색체2E5-G3급8A2-A4;β654/RNAi쌍양성소서검측도홍색β654형광신호급록색RNAi형광신호.경정위분석,β654균정합재염색체7D3-E2,RNAi병독재체칙시수궤정합,기중일지서주요정합재1281위점,이령일지서주요정합재염색체1E2.3-1F、3A3량개위점.결론 용자행제비적DNA탐침건립료고도령민、특이적D-FISH기술,동시결합G현대대쌍양성전기인소서진행염색체기인정위.해기술평태적건립대우전기인동물화기인치료동물모형적연구구유비상중요적의의.
