CAJ | 학술논문

高糖对人单核细胞源树突状细胞分化成熟和免疫功能的影响及其机制研究
고당대인단핵세포원수돌상세포분화성숙화면역공능적영향급기궤제연구
Effects and mechanism of hyperglycemia on development and maturation and immune function of human monocyte derived dendritic cells

万方数据

中华心血管病杂志中華心血管病雜誌 중화심혈관병잡지
Chinese Journal of Cardiology
2006年 1期 60-64 ,共5页

姚康%葛均波%孙爱军%洪晓武%施鸿毓%黄榕翀%贾庆哲%王克强%钟翠平%曹雪涛%邹云增

요강%갈균파%손애군%홍효무%시홍육%황용충%가경철%왕극강%종취평%조설도%추운증

动脉硬化%糖尿病%自身免疫%树突细胞動脈硬化%糖尿病%自身免疫%樹突細胞
동맥경화%당뇨병%자신면역%수돌세포

目的探讨高糖对人单核细胞源的树突状细胞(monocyte derived dendritic cells, MDCs)的分化、成熟及其免疫功能的影响,进一步探索高糖在动脉粥样硬化免疫炎症反应中的作用.方法免疫磁珠法分离人外周血CD14+单核细胞,在含重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF,100 ng/ml)和重组人白细胞介素- 4(rhIL- 4,20 ng/ml)的完全培养基中培养;不成熟MDCs在含有5.5 mmol/L D-葡萄糖、25 mmol/L D-葡萄糖、5.5 mmol/L D-葡萄糖+19.5 mmol/L甘露醇以及25 mmol/L D-葡萄糖+30 mmol/L N-乙酰半胱氨酸(N-acetyleysteine, NAC)RPMI1640完全培养基中继续培养48 h后,采用流式细胞术检测MDCs表型;以MDCs为刺激细胞、同种异体T淋巴细胞为反应细胞按比例混合后,以混合淋巴细胞反应强度观察对树突状细胞抗原递呈和淋巴细胞增殖的影响;ELISA法检测细胞培养上清细胞因子浓度;利用荧光探针还原型二氯荧光素(2′,7′-dichlorodihydrofluorescin, DCFH)在共聚焦显微镜下检测MDCs内活性氧水平(reactive oxygen species, ROS).结果与正常对照组比较,25 mmol/L D-葡萄糖明显增强MDCs内ROS水平(P<.01),显著上调MDCs表面标志CD86、CD83、CD1a、HLA-DR表达,增强T淋巴细胞增殖作用(P<.01)并且促进MDCs分泌细胞因子IFN-γ、IL-10、IL-12、IL-2(P<.05);而ROS抑制剂NAC可部分阻断高糖的上述作用.结论高糖显著增强树突状细胞内ROS,从而促进树突状细胞成熟,激活T淋巴细胞的能力也明显增强,并且通过促进树突状细胞本身释放一些炎症因子,加速和放大炎症免疫反应.这可能是树突状细胞参与动脉粥样硬化炎症免疫反应发生的重要机制之一.
목적탐토고당대인단핵세포원적수돌상세포(monocyte derived dendritic cells, MDCs)적분화、성숙급기면역공능적영향,진일보탐색고당재동맥죽양경화면역염증반응중적작용.방법면역자주법분리인외주혈CD14+단핵세포,재함중조인립-거서세포집락자격인자(rhGM-CSF,100 ng/ml)화중조인백세포개소- 4(rhIL- 4,20 ng/ml)적완전배양기중배양;불성숙MDCs재함유5.5 mmol/L D-포도당、25 mmol/L D-포도당、5.5 mmol/L D-포도당+19.5 mmol/L감로순이급25 mmol/L D-포도당+30 mmol/L N-을선반광안산(N-acetyleysteine, NAC)RPMI1640완전배양기중계속배양48 h후,채용류식세포술검측MDCs표형;이MDCs위자격세포、동충이체T림파세포위반응세포안비례혼합후,이혼합림파세포반응강도관찰대수돌상세포항원체정화림파세포증식적영향;ELISA법검측세포배양상청세포인자농도;이용형광탐침환원형이록형광소(2′,7′-dichlorodihydrofluorescin, DCFH)재공취초현미경하검측MDCs내활성양수평(reactive oxygen species, ROS).결과여정상대조조비교,25 mmol/L D-포도당명현증강MDCs내ROS수평(P<.01),현저상조MDCs표면표지CD86、CD83、CD1a、HLA-DR표체,증강T림파세포증식작용(P<.01)병차촉진MDCs분비세포인자IFN-γ、IL-10、IL-12、IL-2(P<.05);이ROS억제제NAC가부분조단고당적상술작용.결론고당현저증강수돌상세포내ROS,종이촉진수돌상세포성숙,격활T림파세포적능력야명현증강,병차통과촉진수돌상세포본신석방일사염증인자,가속화방대염증면역반응.저가능시수돌상세포삼여동맥죽양경화염증면역반응발생적중요궤제지일.