CAJ | 학술논문

目的建立RT-SHIV病毒全长rt基因单拷贝PCR扩增方法,用于HIV-1 rt基因体内遗传与变异研究.方法 Oligo软件设计RT-SHIV rt基因特异性扩增引物,梯度稀释方法进行特异性和灵敏度筛选,进而优化退火温度和PCR反应最佳循环数等条件,建立rt基因PCR扩增方法;在此基础上将模板进行有限稀释,摸索rt基因单拷贝PCR扩增条件;使用该方法扩增感染猴体内RT-SHIV病毒rt基因,BioEdit软件进行基因序列分析.结果筛选得到一组巢式PCR引物,成功建立了RT-SHIV rt基因PCR扩增方法;当模板浓度为100 copies/μL时,扩增产物为单拷贝序列;测序结果显示RT-SHIV感染猴d266和d294血浆样本分别存在1处和6处氨基酸突变.结论本研究建立的全长rt基因单拷贝PCR扩增方法特异性好、灵敏度高、重复性强,可以应用于各类RT-SHIV病毒的全长rt基因分析.
목적 건립RT-SHIV병독전장rt기인단고패PCR확증방법,용우HIV-1 rt기인체내유전여변이연구.방법 Oligo연건설계RT-SHIV rt기인특이성확증인물,제도희석방법진행특이성화령민도사선,진이우화퇴화온도화PCR반응최가순배수등조건,건립rt기인PCR확증방법;재차기출상장모판진행유한희석,모색rt기인단고패PCR확증조건;사용해방법확증감염후체내RT-SHIV병독rt기인,BioEdit연건진행기인서렬분석.결과 사선득도일조소식PCR인물,성공건립료RT-SHIV rt기인PCR확증방법;당모판농도위100 copies/μL시,확증산물위단고패서렬;측서결과현시RT-SHIV감염후d266화d294혈장양본분별존재1처화6처안기산돌변.결론 본연구건립적전장rt기인단고패PCR확증방법특이성호、령민도고、중복성강,가이응용우각류RT-SHIV병독적전장rt기인분석.