中国医药指南
中國醫藥指南
중국의약지남
CHINA MEDICINE GUIDE
2012年
14期
2-4,11
,共4页
陆忠华%王建华%刘芬菊%楼奕青
陸忠華%王建華%劉芬菊%樓奕青
륙충화%왕건화%류분국%루혁청
转化生长因子-β1%siRNA%线性pRNAT载体
轉化生長因子-β1%siRNA%線性pRNAT載體
전화생장인자-β1%siRNA%선성pRNAT재체
目的 构建人转化生长因子β1(TGF-β1)基因siRNA质粒载体,为放射性肺损伤以及其他TGF-β1高表达疾病的基因治疗提供新的方法.方法 根据人TGF-β1mRNA序列为模板,设计合成相应的寡核苷酸序列,经退火形成双链DNA片段,克隆到线性pRNAT载体中,用酶切方法对重组体进行鉴定,最后将构建的TGF-β1特异性siRNA质粒载体转染人胚肺成纤维细胞HFL-I细胞,通过通过荧光定量PCR检测和ELISA检测TGF-β1 mRNA和蛋白的表达水平,以及流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 酶切和测序证实目的 寡核苷酸片段已被准确克隆到线性pRNAT载体质粒中,与对照组相比,TGF-β1 mRNA水平及蛋白水平的表达量均受到明显抑制,人胚肺成纤维细胞凋亡明显增加,统计有显著性差异(P＜0.05).结论 成功构建了人TGF-β1基因siRNA质粒载体,对于放射性肺损伤以及其他TGF-β1高表达疾病的基因治疗奠定了基础.
目的 構建人轉化生長因子β1(TGF-β1)基因siRNA質粒載體,為放射性肺損傷以及其他TGF-β1高錶達疾病的基因治療提供新的方法.方法 根據人TGF-β1mRNA序列為模闆,設計閤成相應的寡覈苷痠序列,經退火形成雙鏈DNA片段,剋隆到線性pRNAT載體中,用酶切方法對重組體進行鑒定,最後將構建的TGF-β1特異性siRNA質粒載體轉染人胚肺成纖維細胞HFL-I細胞,通過通過熒光定量PCR檢測和ELISA檢測TGF-β1 mRNA和蛋白的錶達水平,以及流式細胞儀檢測細胞凋亡.結果 酶切和測序證實目的 寡覈苷痠片段已被準確剋隆到線性pRNAT載體質粒中,與對照組相比,TGF-β1 mRNA水平及蛋白水平的錶達量均受到明顯抑製,人胚肺成纖維細胞凋亡明顯增加,統計有顯著性差異(P＜0.05).結論 成功構建瞭人TGF-β1基因siRNA質粒載體,對于放射性肺損傷以及其他TGF-β1高錶達疾病的基因治療奠定瞭基礎.
목적 구건인전화생장인자β1(TGF-β1)기인siRNA질립재체,위방사성폐손상이급기타TGF-β1고표체질병적기인치료제공신적방법.방법 근거인TGF-β1mRNA서렬위모판,설계합성상응적과핵감산서렬,경퇴화형성쌍련DNA편단,극륭도선성pRNAT재체중,용매절방법대중조체진행감정,최후장구건적TGF-β1특이성siRNA질립재체전염인배폐성섬유세포HFL-I세포,통과통과형광정량PCR검측화ELISA검측TGF-β1 mRNA화단백적표체수평,이급류식세포의검측세포조망.결과 매절화측서증실목적 과핵감산편단이피준학극륭도선성pRNAT재체질립중,여대조조상비,TGF-β1 mRNA수평급단백수평적표체량균수도명현억제,인배폐성섬유세포조망명현증가,통계유현저성차이(P＜0.05).결론 성공구건료인TGF-β1기인siRNA질립재체,대우방사성폐손상이급기타TGF-β1고표체질병적기인치료전정료기출.
