山西农业大学学报（自然科学版）
山西農業大學學報（自然科學版）
산서농업대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SHANXI AGRICULTURAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2010年
4期
336-339
,共4页
帅丽芳%赵勇%张若霜%银涛%唐博恒
帥麗芳%趙勇%張若霜%銀濤%唐博恆
수려방%조용%장약상%은도%당박항
tTS%基因表达%真核表达载体%HepG2细胞系
tTS%基因錶達%真覈錶達載體%HepG2細胞繫
tTS%기인표체%진핵표체재체%HepG2세포계
为了构建tTS真核表达载体,转染HepG2细胞,建立稳定转染的HepG2细胞系,采用PCR方法,以质粒pTet-tTS为模板扩增tTS基因的编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pApoE-rtTA-Neo,经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染HepG2细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的HepG2细胞系,用RT-PCR、Western blot法检年测tTS的表达,成功构建了pApoE-rtTA-tTS-Neo真核表达载体,并建立了稳定转染的HepG2细胞系,成功地表达目的基因.真核表达载体成功构建和稳定转染HepG2细胞系的建立为进一步研究tTS的功能奠定良好的实验基础.
為瞭構建tTS真覈錶達載體,轉染HepG2細胞,建立穩定轉染的HepG2細胞繫,採用PCR方法,以質粒pTet-tTS為模闆擴增tTS基因的編碼區序列,利用DNA重組技術將其定嚮插入到真覈錶達載體pApoE-rtTA-Neo,經酶切和測序鑒定後,用脂質體轉染法轉染HepG2細胞,通過G418篩選,建立穩定轉染的HepG2細胞繫,用RT-PCR、Western blot法檢年測tTS的錶達,成功構建瞭pApoE-rtTA-tTS-Neo真覈錶達載體,併建立瞭穩定轉染的HepG2細胞繫,成功地錶達目的基因.真覈錶達載體成功構建和穩定轉染HepG2細胞繫的建立為進一步研究tTS的功能奠定良好的實驗基礎.
위료구건tTS진핵표체재체,전염HepG2세포,건립은정전염적HepG2세포계,채용PCR방법,이질립pTet-tTS위모판확증tTS기인적편마구서렬,이용DNA중조기술장기정향삽입도진핵표체재체pApoE-rtTA-Neo,경매절화측서감정후,용지질체전염법전염HepG2세포,통과G418사선,건립은정전염적HepG2세포계,용RT-PCR、Western blot법검년측tTS적표체,성공구건료pApoE-rtTA-tTS-Neo진핵표체재체,병건립료은정전염적HepG2세포계,성공지표체목적기인.진핵표체재체성공구건화은정전염HepG2세포계적건립위진일보연구tTS적공능전정량호적실험기출.
