辽宁医学杂志
遼寧醫學雜誌
료녕의학잡지
MEDICAL JOURNAL OF LIAONING
2010年
2期
64-66
,共3页
任翼%刘永煜%郭微%田大力
任翼%劉永煜%郭微%田大力
임익%류영욱%곽미%전대력
ABCE1%慢病毒载体%RNAi
ABCE1%慢病毒載體%RNAi
ABCE1%만병독재체%RNAi
目的 构建并鉴定ABCE1基因短发夹状干扰RNA(shRNA)慢病毒载体,以便进一步研究ABCE1的功能.方法 针对已经筛选确定的ABCE1基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经BamH Ⅰ和Hind Ⅲ酶切后的pRNAT-U6.1/GFP载体连接、转化,产生pLV-sh-ABCE1慢病毒表达载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用pLV-sh-ABCE1、pHelper 1.0和pHelper 2.0 3种质粒共转染包装细胞人胚肾293T细胞,包装产生重组慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度.结果 PCR和测序证实,成功构建ABCE1 shRNA的慢病毒载体pLV-sh-ABCE1.包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为2×108TU/ML.结论 成功构建ABCE1基因shRNA慢病毒载体,为应用RNAi研究ABCE1功能奠定基础.
目的 構建併鑒定ABCE1基因短髮夾狀榦擾RNA(shRNA)慢病毒載體,以便進一步研究ABCE1的功能.方法 針對已經篩選確定的ABCE1基因RNAi有效靶序列,閤成靶序列的Oligo DNA,退火形成雙鏈DNA,與經BamH Ⅰ和Hind Ⅲ酶切後的pRNAT-U6.1/GFP載體連接、轉化,產生pLV-sh-ABCE1慢病毒錶達載體,PCR篩選暘性剋隆,測序鑒定.用pLV-sh-ABCE1、pHelper 1.0和pHelper 2.0 3種質粒共轉染包裝細胞人胚腎293T細胞,包裝產生重組慢病毒,以293T細胞GFP蛋白的錶達水平測定病毒滴度.結果 PCR和測序證實,成功構建ABCE1 shRNA的慢病毒載體pLV-sh-ABCE1.包裝慢病毒,濃縮病毒懸液的滴度為2×108TU/ML.結論 成功構建ABCE1基因shRNA慢病毒載體,為應用RNAi研究ABCE1功能奠定基礎.
목적 구건병감정ABCE1기인단발협상간우RNA(shRNA)만병독재체,이편진일보연구ABCE1적공능.방법 침대이경사선학정적ABCE1기인RNAi유효파서렬,합성파서렬적Oligo DNA,퇴화형성쌍련DNA,여경BamH Ⅰ화Hind Ⅲ매절후적pRNAT-U6.1/GFP재체련접、전화,산생pLV-sh-ABCE1만병독표체재체,PCR사선양성극륭,측서감정.용pLV-sh-ABCE1、pHelper 1.0화pHelper 2.0 3충질립공전염포장세포인배신293T세포,포장산생중조만병독,이293T세포GFP단백적표체수평측정병독적도.결과 PCR화측서증실,성공구건ABCE1 shRNA적만병독재체pLV-sh-ABCE1.포장만병독,농축병독현액적적도위2×108TU/ML.결론 성공구건ABCE1기인shRNA만병독재체,위응용RNAi연구ABCE1공능전정기출.
