CAJ | 학술논문

目的研究三螺旋形成寡核苷酸与HBV基因的结合情况及其对HBV复制的影响.方法合成一段能与HBV核心启动子位点(1734～1753nt)形成三螺旋的寡核苷酸(TFO20)并标记上生物素,分别用脂质体-TFO20及裸TFO20转染HepG2.2.15细胞,用链酶亲和素-生物素法(SABC)检测其转染效率及其与HepG2.2.15细胞中HBVDNA的结合情况;并采用ELISA半定量逆转录(RT)-PCR及荧光定量PCR法分别检测经寡核苷酸处理的.HepG2.2.15细胞及空白对照细胞上清HBsAg、HBeAg、HBVDNA及细胞中HBVRNA的水平.结果脂质体-TFO20转染HepG2.2.15细胞的效率可达80%,而裸TFO20转染率最高为40%;TFO20主要定位于细胞核及胞浆中.TFO20处理组细胞上清中HBsAg、HBeAg含量分别较空白对照组降低37.0%及78.2%,HBVDNA水平较空白对照组明显降低;而细胞中2.4kh/2.1kbRNA、3.5kb/3.4kbRNA亦分别降低31.6%及70.2%.结论TFO20通过脂质体包裹后可以很好地进入细胞并与HBVDNA结合;TFO20能够有效地抑制HBV复制,发挥抗病毒作用.
목적연구삼라선형성과핵감산여HBV기인적결합정황급기대HBV복제적영향.방법합성일단능여HBV핵심계동자위점(1734～1753nt)형성삼라선적과핵감산(TFO20)병표기상생물소,분별용지질체-TFO20급라TFO20전염HepG2.2.15세포,용련매친화소-생물소법(SABC)검측기전염효솔급기여HepG2.2.15세포중HBVDNA적결합정황;병채용ELISA반정량역전록(RT)-PCR급형광정량PCR법분별검측경과핵감산처리적.HepG2.2.15세포급공백대조세포상청HBsAg、HBeAg、HBVDNA급세포중HBVRNA적수평.결과지질체-TFO20전염HepG2.2.15세포적효솔가체80%,이라TFO20전염솔최고위40%;TFO20주요정위우세포핵급포장중.TFO20처리조세포상청중HBsAg、HBeAg함량분별교공백대조조강저37.0%급78.2%,HBVDNA수평교공백대조조명현강저;이세포중2.4kh/2.1kbRNA、3.5kb/3.4kbRNA역분별강저31.6%급70.2%.결론TFO20통과지질체포과후가이흔호지진입세포병여HBVDNA결합;TFO20능구유효지억제HBV복제,발휘항병독작용.