青岛医药卫生
青島醫藥衛生
청도의약위생
QINGDAO MEDICAL JOURNAL
2009年
1期
5-8
,共4页
Bcl-2%短发夹RNA,shRNA%质粒载体%RNAi
Bcl-2%短髮夾RNA,shRNA%質粒載體%RNAi
Bcl-2%단발협RNA,shRNA%질립재체%RNAi
目的 构建人Bcl-2基因序列特异性的短发夹样RNA(Short Hairpin RNA,shRNA)质粒载体.方法 根据Bcl～2基因序列及shRNA设计原则,化学合成4段编码短发夹RNA的寡核苷酸序列,将其定向克隆到带有卡那霉素抗性和增强绿色荧光蛋白的真核表达载体pGPH1/GFP/Neo中H1启动子的下游,重组构建RNAi质粒,同时设立阴性对照,并对重组质粒进行酶切分析和DNA序列测定.结果 限制性内切酶Pst Ⅰ和BamH Ⅰ酶切显示设计合成的shRNA编码序列被成功插入pGPH1/GFP/Neo质粒中,测序结果证实插入片断与设计序列完全一致.结论 针对人Bcl-2的shRNA真核表达载体成功构建及鉴定为进一步研究Bcl-2功能奠定了良好的基础.
目的 構建人Bcl-2基因序列特異性的短髮夾樣RNA(Short Hairpin RNA,shRNA)質粒載體.方法 根據Bcl～2基因序列及shRNA設計原則,化學閤成4段編碼短髮夾RNA的寡覈苷痠序列,將其定嚮剋隆到帶有卡那黴素抗性和增彊綠色熒光蛋白的真覈錶達載體pGPH1/GFP/Neo中H1啟動子的下遊,重組構建RNAi質粒,同時設立陰性對照,併對重組質粒進行酶切分析和DNA序列測定.結果 限製性內切酶Pst Ⅰ和BamH Ⅰ酶切顯示設計閤成的shRNA編碼序列被成功插入pGPH1/GFP/Neo質粒中,測序結果證實插入片斷與設計序列完全一緻.結論 針對人Bcl-2的shRNA真覈錶達載體成功構建及鑒定為進一步研究Bcl-2功能奠定瞭良好的基礎.
목적 구건인Bcl-2기인서렬특이성적단발협양RNA(Short Hairpin RNA,shRNA)질립재체.방법 근거Bcl～2기인서렬급shRNA설계원칙,화학합성4단편마단발협RNA적과핵감산서렬,장기정향극륭도대유잡나매소항성화증강록색형광단백적진핵표체재체pGPH1/GFP/Neo중H1계동자적하유,중조구건RNAi질립,동시설립음성대조,병대중조질립진행매절분석화DNA서렬측정.결과 한제성내절매Pst Ⅰ화BamH Ⅰ매절현시설계합성적shRNA편마서렬피성공삽입pGPH1/GFP/Neo질립중,측서결과증실삽입편단여설계서렬완전일치.결론 침대인Bcl-2적shRNA진핵표체재체성공구건급감정위진일보연구Bcl-2공능전정료량호적기출.
