中西医结合肝病杂志
中西醫結閤肝病雜誌
중서의결합간병잡지
CHINESE JOURNAL OF INTEGRATED TRADITIONAL AND WESTERN MEDICINE ON LIVER DISEASES
2008年
6期
339-341,359
,共4页
许东%周健%田德英%黄元成%宋佩辉
許東%週健%田德英%黃元成%宋珮輝
허동%주건%전덕영%황원성%송패휘
乙肝病毒核心抗原%CpG基序%树突状细胞%Toll样受体
乙肝病毒覈心抗原%CpG基序%樹突狀細胞%Toll樣受體
을간병독핵심항원%CpG기서%수돌상세포%Toll양수체
目的:构建pEGFP-N1/CpG-HBcAg(ISS)真核表达载体,探讨乙肝病毒核心抗原(HBcAg)在树突状细胞(DC)中的表达,为研制乙肝治疗性疫苗奠定基础.方法:根据HBcAg基因序列,设计合成两对引物,在引物中引入针对人敏感的CpG基序和不含CpG的片段,用PCR方法从慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA中扩增出HBcAg基因片段,将扩增产物与pEGFP-N1连接,构建重组体pEGFP-N1/CpG-HBcAg,进行酶切、PCR及测序鉴定;分离人外周血单个核细胞(PBMC),体外诱导分化为DC,通过脂质体将重组质粒pEGFP-N1/CpG-HBcAg和空载体分别转染DC,Western blot检测HBcAg在DC的表达.结果:HBcAg基因体外扩增产物大小为530bp.所构建的pEGFP-N1/CpG-HBcAg经双酶切及PCR鉴定,与预期片段的大小相符.测序结果与GenBank 中收录的HBcAg全长序列一致,表明pEGFP-N1/CpG-HBcAg真核表达体构建正确;PBMC体外成功刺激分化为DC,HBcAg可在DC中表达.结论:成功构建了真核重组表达载体pEGFP-N1/CpG-HBcAg,且可在DC中表达,为CpG的功能研究和乙型肝炎治疗性疫苗的研制奠定基础.
目的:構建pEGFP-N1/CpG-HBcAg(ISS)真覈錶達載體,探討乙肝病毒覈心抗原(HBcAg)在樹突狀細胞(DC)中的錶達,為研製乙肝治療性疫苗奠定基礎.方法:根據HBcAg基因序列,設計閤成兩對引物,在引物中引入針對人敏感的CpG基序和不含CpG的片段,用PCR方法從慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA中擴增齣HBcAg基因片段,將擴增產物與pEGFP-N1連接,構建重組體pEGFP-N1/CpG-HBcAg,進行酶切、PCR及測序鑒定;分離人外週血單箇覈細胞(PBMC),體外誘導分化為DC,通過脂質體將重組質粒pEGFP-N1/CpG-HBcAg和空載體分彆轉染DC,Western blot檢測HBcAg在DC的錶達.結果:HBcAg基因體外擴增產物大小為530bp.所構建的pEGFP-N1/CpG-HBcAg經雙酶切及PCR鑒定,與預期片段的大小相符.測序結果與GenBank 中收錄的HBcAg全長序列一緻,錶明pEGFP-N1/CpG-HBcAg真覈錶達體構建正確;PBMC體外成功刺激分化為DC,HBcAg可在DC中錶達.結論:成功構建瞭真覈重組錶達載體pEGFP-N1/CpG-HBcAg,且可在DC中錶達,為CpG的功能研究和乙型肝炎治療性疫苗的研製奠定基礎.
목적:구건pEGFP-N1/CpG-HBcAg(ISS)진핵표체재체,탐토을간병독핵심항원(HBcAg)재수돌상세포(DC)중적표체,위연제을간치료성역묘전정기출.방법:근거HBcAg기인서렬,설계합성량대인물,재인물중인입침대인민감적CpG기서화불함CpG적편단,용PCR방법종만성을형간염환자혈청HBV DNA중확증출HBcAg기인편단,장확증산물여pEGFP-N1련접,구건중조체pEGFP-N1/CpG-HBcAg,진행매절、PCR급측서감정;분리인외주혈단개핵세포(PBMC),체외유도분화위DC,통과지질체장중조질립pEGFP-N1/CpG-HBcAg화공재체분별전염DC,Western blot검측HBcAg재DC적표체.결과:HBcAg기인체외확증산물대소위530bp.소구건적pEGFP-N1/CpG-HBcAg경쌍매절급PCR감정,여예기편단적대소상부.측서결과여GenBank 중수록적HBcAg전장서렬일치,표명pEGFP-N1/CpG-HBcAg진핵표체체구건정학;PBMC체외성공자격분화위DC,HBcAg가재DC중표체.결론:성공구건료진핵중조표체재체pEGFP-N1/CpG-HBcAg,차가재DC중표체,위CpG적공능연구화을형간염치료성역묘적연제전정기출.
