昆虫学报
昆蟲學報
곤충학보
ACTA ENTOMOLOGICA SINICA
2008年
11期
1138-1143
,共6页
昆虫神经毒素%BjαIT%大肠杆菌%毕赤酵母%融合表达%东亚飞蝗%德国小蠊%杀虫活性
昆蟲神經毒素%BjαIT%大腸桿菌%畢赤酵母%融閤錶達%東亞飛蝗%德國小蠊%殺蟲活性
곤충신경독소%BjαIT%대장간균%필적효모%융합표체%동아비황%덕국소렴%살충활성
根据毕赤酵母Pichia pastoris密码子偏爱性,不改变毒素蛋白质一级结构,设计合成了昆虫神经毒素BjαIT基因,并分别克隆至大肠杆菌Escherichia coli融合表达载体pPET30-a(+)和毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K.在IPTG的诱导下,神经毒素在大肠杆菌中融合表达,表达产物利用镍亲和层析柱纯化,纯化产物用于制备抗血清和活性测试.采用斑点杂交,筛选得到了较高水平分泌表达重组BjαIT的酵母转化子,摇瓶条件下,毒素表达量最大可达约20 mg/L.大肠杆菌BjαIT表达产物对东亚飞蝗Locusta migratoria manilensis和德国小蠊Blattela germanica没有活性,但酵母表达产物经注射东亚飞蝗和德国小蠊表现出杀虫活性.
根據畢赤酵母Pichia pastoris密碼子偏愛性,不改變毒素蛋白質一級結構,設計閤成瞭昆蟲神經毒素BjαIT基因,併分彆剋隆至大腸桿菌Escherichia coli融閤錶達載體pPET30-a(+)和畢赤酵母分泌錶達載體pPIC9K.在IPTG的誘導下,神經毒素在大腸桿菌中融閤錶達,錶達產物利用鎳親和層析柱純化,純化產物用于製備抗血清和活性測試.採用斑點雜交,篩選得到瞭較高水平分泌錶達重組BjαIT的酵母轉化子,搖瓶條件下,毒素錶達量最大可達約20 mg/L.大腸桿菌BjαIT錶達產物對東亞飛蝗Locusta migratoria manilensis和德國小蠊Blattela germanica沒有活性,但酵母錶達產物經註射東亞飛蝗和德國小蠊錶現齣殺蟲活性.
근거필적효모Pichia pastoris밀마자편애성,불개변독소단백질일급결구,설계합성료곤충신경독소BjαIT기인,병분별극륭지대장간균Escherichia coli융합표체재체pPET30-a(+)화필적효모분비표체재체pPIC9K.재IPTG적유도하,신경독소재대장간균중융합표체,표체산물이용얼친화층석주순화,순화산물용우제비항혈청화활성측시.채용반점잡교,사선득도료교고수평분비표체중조BjαIT적효모전화자,요병조건하,독소표체량최대가체약20 mg/L.대장간균BjαIT표체산물대동아비황Locusta migratoria manilensis화덕국소렴Blattela germanica몰유활성,단효모표체산물경주사동아비황화덕국소렴표현출살충활성.
