解放军预防医学杂志
解放軍預防醫學雜誌
해방군예방의학잡지
JOURNAL OF PREVENTIVE MEDICINE OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY
2008年
6期
395-398
,共4页
白细胞介素-10%基因克隆%真核表达载体%体外表达
白細胞介素-10%基因剋隆%真覈錶達載體%體外錶達
백세포개소-10%기인극륭%진핵표체재체%체외표체
目的 克隆人白细胞介素10(hIL-10)基因,以构建真核表达载体,并检测其在COS-7细胞中的表达情况.方法 从人全血标本中提取细胞总RNA,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增hIL-10基因,分别构建含hIL-10目的 基因的克隆载体与表达载体,提取质粒,经酶切、PCR和DNA测序鉴定;重组表达载体pVAX1-hIL10转染COS-7细胞,观测hIL-10的瞬时表达情况.结果 构建了重组克隆载体pMD18T-hIL10和真核表达载体pVAX1-hIL10,经酶切、PCR及测序鉴定正确,插入片段序列与GenBank已公布的hIL-10基因序列一致;pVAX1-hIL10可以有效地转染COS-7细胞,Western blot结果 表明hIL-10在COS-7细胞中瞬时表达.结论 成功克隆了hIL-10基因,构建的表达载体pVAX1-hIL10在COS-7细胞中瞬时表达hIL-10蛋白,为进一步研究其生物学功能和临床应用奠定了基础.
目的 剋隆人白細胞介素10(hIL-10)基因,以構建真覈錶達載體,併檢測其在COS-7細胞中的錶達情況.方法 從人全血標本中提取細胞總RNA,以逆轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR)法擴增hIL-10基因,分彆構建含hIL-10目的 基因的剋隆載體與錶達載體,提取質粒,經酶切、PCR和DNA測序鑒定;重組錶達載體pVAX1-hIL10轉染COS-7細胞,觀測hIL-10的瞬時錶達情況.結果 構建瞭重組剋隆載體pMD18T-hIL10和真覈錶達載體pVAX1-hIL10,經酶切、PCR及測序鑒定正確,插入片段序列與GenBank已公佈的hIL-10基因序列一緻;pVAX1-hIL10可以有效地轉染COS-7細胞,Western blot結果 錶明hIL-10在COS-7細胞中瞬時錶達.結論 成功剋隆瞭hIL-10基因,構建的錶達載體pVAX1-hIL10在COS-7細胞中瞬時錶達hIL-10蛋白,為進一步研究其生物學功能和臨床應用奠定瞭基礎.
목적 극륭인백세포개소10(hIL-10)기인,이구건진핵표체재체,병검측기재COS-7세포중적표체정황.방법 종인전혈표본중제취세포총RNA,이역전록취합매련반응(RT-PCR)법확증hIL-10기인,분별구건함hIL-10목적 기인적극륭재체여표체재체,제취질립,경매절、PCR화DNA측서감정;중조표체재체pVAX1-hIL10전염COS-7세포,관측hIL-10적순시표체정황.결과 구건료중조극륭재체pMD18T-hIL10화진핵표체재체pVAX1-hIL10,경매절、PCR급측서감정정학,삽입편단서렬여GenBank이공포적hIL-10기인서렬일치;pVAX1-hIL10가이유효지전염COS-7세포,Western blot결과 표명hIL-10재COS-7세포중순시표체.결론 성공극륭료hIL-10기인,구건적표체재체pVAX1-hIL10재COS-7세포중순시표체hIL-10단백,위진일보연구기생물학공능화림상응용전정료기출.
