中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2008年
11期
2138-2141
,共4页
刘建伟%叶玲%刘静%牛东滨%杜明梅%高宇红
劉建偉%葉玲%劉靜%牛東濱%杜明梅%高宇紅
류건위%협령%류정%우동빈%두명매%고우홍
醛糖还原酶%绿色荧光蛋白%基因表达%HEK293细胞
醛糖還原酶%綠色熒光蛋白%基因錶達%HEK293細胞
철당환원매%록색형광단백%기인표체%HEK293세포
目的:构建由绿色荧光蛋白(GFP)标记的人醛糖还原酶(AR)融合基因真核表达载体并在HEK293细胞中表达.方法:应用DNA重组技术构建AR与GFP的融合基因(AR-GFP),将AR-GFP插入peD-NA3.1/myc-HisA真核表达载体中,通过磷酸钙共沉淀转染HEK293细胞,倒置荧光显微镜评价转染效率,Westernblotting技术检测AR基因在转染细胞中的整合及表达,分光光度法(UV法)测定AR表达活性,用公认的AR抑制剂(ARI)反证活性AR的存在.结果:荧光显微镜对转染细胞的观察及Weatem blotting结果证实AR-GFP融合蛋白在HEK293细胞中表达,UV法测活、ARI抑制试验均未证实其生物学活性.结论:转染的HEK293细胞可成功地表达AR-GFP融合蛋白,但不能成为ARI真核细胞筛选模型.
目的:構建由綠色熒光蛋白(GFP)標記的人醛糖還原酶(AR)融閤基因真覈錶達載體併在HEK293細胞中錶達.方法:應用DNA重組技術構建AR與GFP的融閤基因(AR-GFP),將AR-GFP插入peD-NA3.1/myc-HisA真覈錶達載體中,通過燐痠鈣共沉澱轉染HEK293細胞,倒置熒光顯微鏡評價轉染效率,Westernblotting技術檢測AR基因在轉染細胞中的整閤及錶達,分光光度法(UV法)測定AR錶達活性,用公認的AR抑製劑(ARI)反證活性AR的存在.結果:熒光顯微鏡對轉染細胞的觀察及Weatem blotting結果證實AR-GFP融閤蛋白在HEK293細胞中錶達,UV法測活、ARI抑製試驗均未證實其生物學活性.結論:轉染的HEK293細胞可成功地錶達AR-GFP融閤蛋白,但不能成為ARI真覈細胞篩選模型.
목적:구건유록색형광단백(GFP)표기적인철당환원매(AR)융합기인진핵표체재체병재HEK293세포중표체.방법:응용DNA중조기술구건AR여GFP적융합기인(AR-GFP),장AR-GFP삽입peD-NA3.1/myc-HisA진핵표체재체중,통과린산개공침정전염HEK293세포,도치형광현미경평개전염효솔,Westernblotting기술검측AR기인재전염세포중적정합급표체,분광광도법(UV법)측정AR표체활성,용공인적AR억제제(ARI)반증활성AR적존재.결과:형광현미경대전염세포적관찰급Weatem blotting결과증실AR-GFP융합단백재HEK293세포중표체,UV법측활、ARI억제시험균미증실기생물학활성.결론:전염적HEK293세포가성공지표체AR-GFP융합단백,단불능성위ARI진핵세포사선모형.
