食品科学
食品科學
식품과학
FOOD SCIENCE
2008年
10期
428-432
,共5页
陈文炳%林媛%王泽生%邵碧英%廖剑华%李寿崧%江树勋%林河通
陳文炳%林媛%王澤生%邵碧英%廖劍華%李壽崧%江樹勛%林河通
진문병%림원%왕택생%소벽영%료검화%리수숭%강수훈%림하통
蘑菇%RAPD-PCR%体系优化
蘑菇%RAPD-PCR%體繫優化
마고%RAPD-PCR%체계우화
本研究对6个影响双孢蘑菇RAPD-PCR反应的关键因素进行了一系列优化,目的在于建立理想的RAPD最佳反应条件和反应体系,为大量双孢蘑菇品种间的RAPD多样性分析做准备.各关键因素梯度设置如下:(1)7个退火温度梯度:33.5、36.5、38.3、40.1、43.7、45.4、48.1℃.(2)6个Mg2+浓度梯度:0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3mmol/L.(3)5个Taq酶用量梯度:0.5、1.0、1.5、2.0、2.5U.(4)5个dNTPs浓度梯度:0.10、0.15、0.20、0.25、0.30mmol/L.(5)5个引物浓度梯度:0.1、0.2、o.3、0.4、0.5lamol/L.(6)7个模板DNA用量梯度:100、20、4、0.8、0.16、0.032、Ong.实验结果表明:最佳的RAPD反应体系为:10×buffer 2.0μl、Taq酶1.5U、模板DNA4-100ng、MgCl2 2.0mmol/L、dNTP 0.20mmol/L,引物0.3μmol/L,加ddH20至20μl.PCR热循环参数为94℃预变性5 min;94℃变性lmin,44℃退火1min 50s,72℃延伸2min,循环40次;最后72℃延伸7min.
本研究對6箇影響雙孢蘑菇RAPD-PCR反應的關鍵因素進行瞭一繫列優化,目的在于建立理想的RAPD最佳反應條件和反應體繫,為大量雙孢蘑菇品種間的RAPD多樣性分析做準備.各關鍵因素梯度設置如下:(1)7箇退火溫度梯度:33.5、36.5、38.3、40.1、43.7、45.4、48.1℃.(2)6箇Mg2+濃度梯度:0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3mmol/L.(3)5箇Taq酶用量梯度:0.5、1.0、1.5、2.0、2.5U.(4)5箇dNTPs濃度梯度:0.10、0.15、0.20、0.25、0.30mmol/L.(5)5箇引物濃度梯度:0.1、0.2、o.3、0.4、0.5lamol/L.(6)7箇模闆DNA用量梯度:100、20、4、0.8、0.16、0.032、Ong.實驗結果錶明:最佳的RAPD反應體繫為:10×buffer 2.0μl、Taq酶1.5U、模闆DNA4-100ng、MgCl2 2.0mmol/L、dNTP 0.20mmol/L,引物0.3μmol/L,加ddH20至20μl.PCR熱循環參數為94℃預變性5 min;94℃變性lmin,44℃退火1min 50s,72℃延伸2min,循環40次;最後72℃延伸7min.
본연구대6개영향쌍포마고RAPD-PCR반응적관건인소진행료일계렬우화,목적재우건립이상적RAPD최가반응조건화반응체계,위대량쌍포마고품충간적RAPD다양성분석주준비.각관건인소제도설치여하:(1)7개퇴화온도제도:33.5、36.5、38.3、40.1、43.7、45.4、48.1℃.(2)6개Mg2+농도제도:0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3mmol/L.(3)5개Taq매용량제도:0.5、1.0、1.5、2.0、2.5U.(4)5개dNTPs농도제도:0.10、0.15、0.20、0.25、0.30mmol/L.(5)5개인물농도제도:0.1、0.2、o.3、0.4、0.5lamol/L.(6)7개모판DNA용량제도:100、20、4、0.8、0.16、0.032、Ong.실험결과표명:최가적RAPD반응체계위:10×buffer 2.0μl、Taq매1.5U、모판DNA4-100ng、MgCl2 2.0mmol/L、dNTP 0.20mmol/L,인물0.3μmol/L,가ddH20지20μl.PCR열순배삼수위94℃예변성5 min;94℃변성lmin,44℃퇴화1min 50s,72℃연신2min,순배40차;최후72℃연신7min.
