中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2008年
4期
7-11
,共5页
NBS1基因%RNA干扰%microRNA
NBS1基因%RNA榦擾%microRNA
NBS1기인%RNA간우%microRNA
目的:构建靶向NBS1基因的 microRNA真核表达载体,鉴定其转染宫颈癌细胞株Hela后的生物活性.方法:根据NBS1mRNA序列设计合成4对pre- microRNA片段,定向克隆到pcDNA 6.2- GW/EmGFP-miR真核表达载体上,并将其转染至Hela细胞株中.采用菌落PCR和测序分析鉴定插入序列的完整性;采用实时荧光定量PCR和Western blot检测鉴定重组体对NBS1基因表达的干扰效果以确定其生物活性.结果:构建的4组重组体插入片段的碱基序列完全正确.重组体能干扰Hela细胞NBS1基因的表达,4组重组体NBS1基因 mRNA的表达水平和蛋白表达水平均降低,其中NBS1mi-2组的表达水平最低.结论:构建的4组NBS1 microRNA重组体在Hela细胞株中都具有生物活性,且NBS1mi-2组的干扰作用最强.载体构建成功,为应用microRNA靶向NBS1的肿瘤基因治疗的研究奠定了基础.
目的:構建靶嚮NBS1基因的 microRNA真覈錶達載體,鑒定其轉染宮頸癌細胞株Hela後的生物活性.方法:根據NBS1mRNA序列設計閤成4對pre- microRNA片段,定嚮剋隆到pcDNA 6.2- GW/EmGFP-miR真覈錶達載體上,併將其轉染至Hela細胞株中.採用菌落PCR和測序分析鑒定插入序列的完整性;採用實時熒光定量PCR和Western blot檢測鑒定重組體對NBS1基因錶達的榦擾效果以確定其生物活性.結果:構建的4組重組體插入片段的堿基序列完全正確.重組體能榦擾Hela細胞NBS1基因的錶達,4組重組體NBS1基因 mRNA的錶達水平和蛋白錶達水平均降低,其中NBS1mi-2組的錶達水平最低.結論:構建的4組NBS1 microRNA重組體在Hela細胞株中都具有生物活性,且NBS1mi-2組的榦擾作用最彊.載體構建成功,為應用microRNA靶嚮NBS1的腫瘤基因治療的研究奠定瞭基礎.
목적:구건파향NBS1기인적 microRNA진핵표체재체,감정기전염궁경암세포주Hela후적생물활성.방법:근거NBS1mRNA서렬설계합성4대pre- microRNA편단,정향극륭도pcDNA 6.2- GW/EmGFP-miR진핵표체재체상,병장기전염지Hela세포주중.채용균락PCR화측서분석감정삽입서렬적완정성;채용실시형광정량PCR화Western blot검측감정중조체대NBS1기인표체적간우효과이학정기생물활성.결과:구건적4조중조체삽입편단적감기서렬완전정학.중조체능간우Hela세포NBS1기인적표체,4조중조체NBS1기인 mRNA적표체수평화단백표체수평균강저,기중NBS1mi-2조적표체수평최저.결론:구건적4조NBS1 microRNA중조체재Hela세포주중도구유생물활성,차NBS1mi-2조적간우작용최강.재체구건성공,위응용microRNA파향NBS1적종류기인치료적연구전정료기출.
