中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2008年
2期
335-339
,共5页
白雪源%马玉香%罗成华%师锁柱%侯剀%冯哲%傅博%陈香美
白雪源%馬玉香%囉成華%師鎖柱%侯剴%馮哲%傅博%陳香美
백설원%마옥향%라성화%사쇄주%후개%풍철%부박%진향미
胆汁酸类%肾小管%亚细胞定位%载体蛋白质类
膽汁痠類%腎小管%亞細胞定位%載體蛋白質類
담즙산류%신소관%아세포정위%재체단백질류
目的:克隆人肾与小肠ASBT(顶端Na+/胆汁酸协同转运蛋白)基因并比较2者的序列差别,明确ASBT蛋白在肾小管上皮的亚细胞定位及在人肾组织中的表达情况.方法:从人肾和小肠组织中提取总RNA,然后用带有8肽FLAG标签的PCR引物通过RT-PCR技术扩增ASBT全长cDNA基因并测序,并将其插入真核表达载体中构建ASBT蛋白真核表达载体,然后将其转染到肾小管上皮细胞LLC-PK1中表达并用免疫荧光-激光共聚焦显微镜观察该蛋白的亚细胞定位情况.用免疫组化技术观察ASBT在人肾组织中的表达分布.结果:序列分析结果表明肾小管ASBT基因的序列与小肠ASBT序列完全一致.Western blotting表明ASBT基因在LLC-PK1细胞中得到了正确的表达.共聚焦显微镜分析显示正常ASBT蛋白主要定位于肾小管上皮细胞膜上,与生物信息学的预测结果一致.免疫组化染色表明ASBT蛋白主要表达于人近端肾小管上皮的刷状缘侧,在间质及远端小管没有表达.结论:人肾小管ASBT基因序列与小肠ASBT相同,ASBT蛋白主要表达于近端肾小管上皮细胞管腔侧细胞膜.
目的:剋隆人腎與小腸ASBT(頂耑Na+/膽汁痠協同轉運蛋白)基因併比較2者的序列差彆,明確ASBT蛋白在腎小管上皮的亞細胞定位及在人腎組織中的錶達情況.方法:從人腎和小腸組織中提取總RNA,然後用帶有8肽FLAG標籤的PCR引物通過RT-PCR技術擴增ASBT全長cDNA基因併測序,併將其插入真覈錶達載體中構建ASBT蛋白真覈錶達載體,然後將其轉染到腎小管上皮細胞LLC-PK1中錶達併用免疫熒光-激光共聚焦顯微鏡觀察該蛋白的亞細胞定位情況.用免疫組化技術觀察ASBT在人腎組織中的錶達分佈.結果:序列分析結果錶明腎小管ASBT基因的序列與小腸ASBT序列完全一緻.Western blotting錶明ASBT基因在LLC-PK1細胞中得到瞭正確的錶達.共聚焦顯微鏡分析顯示正常ASBT蛋白主要定位于腎小管上皮細胞膜上,與生物信息學的預測結果一緻.免疫組化染色錶明ASBT蛋白主要錶達于人近耑腎小管上皮的刷狀緣側,在間質及遠耑小管沒有錶達.結論:人腎小管ASBT基因序列與小腸ASBT相同,ASBT蛋白主要錶達于近耑腎小管上皮細胞管腔側細胞膜.
목적:극륭인신여소장ASBT(정단Na+/담즙산협동전운단백)기인병비교2자적서렬차별,명학ASBT단백재신소관상피적아세포정위급재인신조직중적표체정황.방법:종인신화소장조직중제취총RNA,연후용대유8태FLAG표첨적PCR인물통과RT-PCR기술확증ASBT전장cDNA기인병측서,병장기삽입진핵표체재체중구건ASBT단백진핵표체재체,연후장기전염도신소관상피세포LLC-PK1중표체병용면역형광-격광공취초현미경관찰해단백적아세포정위정황.용면역조화기술관찰ASBT재인신조직중적표체분포.결과:서렬분석결과표명신소관ASBT기인적서렬여소장ASBT서렬완전일치.Western blotting표명ASBT기인재LLC-PK1세포중득도료정학적표체.공취초현미경분석현시정상ASBT단백주요정위우신소관상피세포막상,여생물신식학적예측결과일치.면역조화염색표명ASBT단백주요표체우인근단신소관상피적쇄상연측,재간질급원단소관몰유표체.결론:인신소관ASBT기인서렬여소장ASBT상동,ASBT단백주요표체우근단신소관상피세포관강측세포막.
