中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2007年
12期
932-936
,共5页
赵晨燕%阎宝山%张峰%李卓%张春涛%王佑春
趙晨燕%閻寶山%張峰%李卓%張春濤%王祐春
조신연%염보산%장봉%리탁%장춘도%왕우춘
戊型肝炎病毒%核糖核酸%实时荧光逆转录聚合酶链反应%优化
戊型肝炎病毒%覈糖覈痠%實時熒光逆轉錄聚閤酶鏈反應%優化
무형간염병독%핵당핵산%실시형광역전록취합매련반응%우화
目的 建立一种能快速、敏感地检测戊型肝炎病毒(HEV)核酸的实时荧光聚合酶链反应法(Real-time RT-PCR).方法 基于HEV ORF3保守区序列,设计引物和探针,从22对引物和4条探针中进行筛选,并对选出的引物和探针的浓度、反应体系、反应条件、核酸抽提方法等进行优化.采用常规套式RT-PCR和本研究建立的实时荧光RT-PCR检测不同样品,比较两种方法的特异性和敏感性.结果 优化出1对引物和探针的组合.优化的30μl反应体系中,上、下游引物浓度均为0.10mmol/L,探针浓度为0.20 mmol/L,Taq酶的浓度为3U,AMV逆转录酶浓度为2U.优化的反应条件为:50% 30min;95℃3min;95℃10s,50℃ 30s,72℃60s,5个循环;95℃ 10s,57℃40s,40个循环.初步检测结果显示,该方法与常规套式RT-PCR特异性符合率为100%,两种方法检测HEV1型样品的敏感性均为104,检测人和猪的HEV4型样品时,实时荧光RT-PCR敏感性均为104,明显高于常规套式RT-PCR的103和102.结论 所建立的检测HEV核酸的实时荧光聚合酶链反应法具有简便、快速、敏感性较高以及不易被污染等优点,具有一定的临床应用潜力.
目的 建立一種能快速、敏感地檢測戊型肝炎病毒(HEV)覈痠的實時熒光聚閤酶鏈反應法(Real-time RT-PCR).方法 基于HEV ORF3保守區序列,設計引物和探針,從22對引物和4條探針中進行篩選,併對選齣的引物和探針的濃度、反應體繫、反應條件、覈痠抽提方法等進行優化.採用常規套式RT-PCR和本研究建立的實時熒光RT-PCR檢測不同樣品,比較兩種方法的特異性和敏感性.結果 優化齣1對引物和探針的組閤.優化的30μl反應體繫中,上、下遊引物濃度均為0.10mmol/L,探針濃度為0.20 mmol/L,Taq酶的濃度為3U,AMV逆轉錄酶濃度為2U.優化的反應條件為:50% 30min;95℃3min;95℃10s,50℃ 30s,72℃60s,5箇循環;95℃ 10s,57℃40s,40箇循環.初步檢測結果顯示,該方法與常規套式RT-PCR特異性符閤率為100%,兩種方法檢測HEV1型樣品的敏感性均為104,檢測人和豬的HEV4型樣品時,實時熒光RT-PCR敏感性均為104,明顯高于常規套式RT-PCR的103和102.結論 所建立的檢測HEV覈痠的實時熒光聚閤酶鏈反應法具有簡便、快速、敏感性較高以及不易被汙染等優點,具有一定的臨床應用潛力.
목적 건립일충능쾌속、민감지검측무형간염병독(HEV)핵산적실시형광취합매련반응법(Real-time RT-PCR).방법 기우HEV ORF3보수구서렬,설계인물화탐침,종22대인물화4조탐침중진행사선,병대선출적인물화탐침적농도、반응체계、반응조건、핵산추제방법등진행우화.채용상규투식RT-PCR화본연구건립적실시형광RT-PCR검측불동양품,비교량충방법적특이성화민감성.결과 우화출1대인물화탐침적조합.우화적30μl반응체계중,상、하유인물농도균위0.10mmol/L,탐침농도위0.20 mmol/L,Taq매적농도위3U,AMV역전록매농도위2U.우화적반응조건위:50% 30min;95℃3min;95℃10s,50℃ 30s,72℃60s,5개순배;95℃ 10s,57℃40s,40개순배.초보검측결과현시,해방법여상규투식RT-PCR특이성부합솔위100%,량충방법검측HEV1형양품적민감성균위104,검측인화저적HEV4형양품시,실시형광RT-PCR민감성균위104,명현고우상규투식RT-PCR적103화102.결론 소건립적검측HEV핵산적실시형광취합매련반응법구유간편、쾌속、민감성교고이급불역피오염등우점,구유일정적림상응용잠력.
