现代预防医学
現代預防醫學
현대예방의학
MODERN PREVENTIVE MEDICINE
2007年
20期
3837-3839
,共3页
石胜%朱振宇%熊燕%王小朝%陈青龙%许鸿灏%卢岑%陈炎添
石勝%硃振宇%熊燕%王小朝%陳青龍%許鴻灝%盧岑%陳炎添
석성%주진우%웅연%왕소조%진청룡%허홍호%로잠%진염첨
聚合酶链反应(PCR)%限制性酶切片段长度多态性(RFLP)%16S rRNA基因%16S-23S rRNA间区基因%毛细管电泳%病原菌
聚閤酶鏈反應(PCR)%限製性酶切片段長度多態性(RFLP)%16S rRNA基因%16S-23S rRNA間區基因%毛細管電泳%病原菌
취합매련반응(PCR)%한제성매절편단장도다태성(RFLP)%16S rRNA기인%16S-23S rRNA간구기인%모세관전영%병원균
[目的]初步建立一个临床常见病原菌的标准PCR-CE-RFLP数据库,为临床快速鉴定病原菌奠定基础.[方法]选取临床分离的病原菌共167株,筛选16S rRNA基因和16S-23S rRNA间区基因的合适引物,分别用FAM和JOE两种荧光素标记,调整PCR反应条件,让两种引物能同时在同一条件下反应,所得产物先用普通琼脂糖凝胶电泳,再分别用限制性内切酶HaeⅢ进行不完全酶切,酶切产物50倍稀释后进行毛细管电泳(PCR-CE-RFLP),测定酶切片段长度差异.[结果]针对16S rRNA基因的RFLP谱数据只能将病原菌鉴定到"科"的程度,而单纯应用16S-23S rRNA间区基因的RFLP谱数据虽能区分绝大多数细菌,但个别种属内仍然出现相似的谱型.经过双位点PCR-CE-RFLP分析后,则可将所有细菌鉴定到"种"的程度.[结论]利用16S rRNA基因和16S-23S rRNA间区基因PCR-CE-RFLP进行细菌鉴定简便快捷,能将传统方法需要十几个小时甚至几十小时的鉴定工作缩短到几个小时,是一种极有临床应用价值的快速诊断方法.
[目的]初步建立一箇臨床常見病原菌的標準PCR-CE-RFLP數據庫,為臨床快速鑒定病原菌奠定基礎.[方法]選取臨床分離的病原菌共167株,篩選16S rRNA基因和16S-23S rRNA間區基因的閤適引物,分彆用FAM和JOE兩種熒光素標記,調整PCR反應條件,讓兩種引物能同時在同一條件下反應,所得產物先用普通瓊脂糖凝膠電泳,再分彆用限製性內切酶HaeⅢ進行不完全酶切,酶切產物50倍稀釋後進行毛細管電泳(PCR-CE-RFLP),測定酶切片段長度差異.[結果]針對16S rRNA基因的RFLP譜數據隻能將病原菌鑒定到"科"的程度,而單純應用16S-23S rRNA間區基因的RFLP譜數據雖能區分絕大多數細菌,但箇彆種屬內仍然齣現相似的譜型.經過雙位點PCR-CE-RFLP分析後,則可將所有細菌鑒定到"種"的程度.[結論]利用16S rRNA基因和16S-23S rRNA間區基因PCR-CE-RFLP進行細菌鑒定簡便快捷,能將傳統方法需要十幾箇小時甚至幾十小時的鑒定工作縮短到幾箇小時,是一種極有臨床應用價值的快速診斷方法.
[목적]초보건립일개림상상견병원균적표준PCR-CE-RFLP수거고,위림상쾌속감정병원균전정기출.[방법]선취림상분리적병원균공167주,사선16S rRNA기인화16S-23S rRNA간구기인적합괄인물,분별용FAM화JOE량충형광소표기,조정PCR반응조건,양량충인물능동시재동일조건하반응,소득산물선용보통경지당응효전영,재분별용한제성내절매HaeⅢ진행불완전매절,매절산물50배희석후진행모세관전영(PCR-CE-RFLP),측정매절편단장도차이.[결과]침대16S rRNA기인적RFLP보수거지능장병원균감정도"과"적정도,이단순응용16S-23S rRNA간구기인적RFLP보수거수능구분절대다수세균,단개별충속내잉연출현상사적보형.경과쌍위점PCR-CE-RFLP분석후,칙가장소유세균감정도"충"적정도.[결론]이용16S rRNA기인화16S-23S rRNA간구기인PCR-CE-RFLP진행세균감정간편쾌첩,능장전통방법수요십궤개소시심지궤십소시적감정공작축단도궤개소시,시일충겁유림상응용개치적쾌속진단방법.
