细胞生物学杂志
細胞生物學雜誌
세포생물학잡지
CHINESE JOURNAL OF CELL BIOLOGY
2007年
5期
771-776
,共6页
王一成%石嘉豪%张元兴%费俭
王一成%石嘉豪%張元興%費儉
왕일성%석가호%장원흥%비검
单体胰岛素前体%B链C端去四肽胰岛素%胰蛋白酶%羧肽酶B
單體胰島素前體%B鏈C耑去四肽胰島素%胰蛋白酶%羧肽酶B
단체이도소전체%B련C단거사태이도소%이단백매%최태매B
报道了将单体胰岛素前体(MIP)经胰蛋白酶和羧肽酶B两步连续酶切获得B链C端去四肽胰岛素(DTI)的方法.MIP由甲醇酵母表达,最高发酵表达量达到150 mg/L.发酵液中MIP通过疏水层析,分子筛初步纯化后直接进行酶切,在胰蛋白酶酶切3 h后加入抑制剂p-aminobenzamidine处理15 min,然后直接加入羧肽酶B酶切6 h,再通过反相柱纯化即可得到纯品DTI,从分子筛到最后DTI,总纯化得率达到77%.按中国药典小白鼠惊厥法测定得DTI的生物活力为22 IU/mg,是胰岛素的80%,在Superdex G-75分子筛上测定DTI的解离聚合曲线,证明其是单体.
報道瞭將單體胰島素前體(MIP)經胰蛋白酶和羧肽酶B兩步連續酶切穫得B鏈C耑去四肽胰島素(DTI)的方法.MIP由甲醇酵母錶達,最高髮酵錶達量達到150 mg/L.髮酵液中MIP通過疏水層析,分子篩初步純化後直接進行酶切,在胰蛋白酶酶切3 h後加入抑製劑p-aminobenzamidine處理15 min,然後直接加入羧肽酶B酶切6 h,再通過反相柱純化即可得到純品DTI,從分子篩到最後DTI,總純化得率達到77%.按中國藥典小白鼠驚厥法測定得DTI的生物活力為22 IU/mg,是胰島素的80%,在Superdex G-75分子篩上測定DTI的解離聚閤麯線,證明其是單體.
보도료장단체이도소전체(MIP)경이단백매화최태매B량보련속매절획득B련C단거사태이도소(DTI)적방법.MIP유갑순효모표체,최고발효표체량체도150 mg/L.발효액중MIP통과소수층석,분자사초보순화후직접진행매절,재이단백매매절3 h후가입억제제p-aminobenzamidine처리15 min,연후직접가입최태매B매절6 h,재통과반상주순화즉가득도순품DTI,종분자사도최후DTI,총순화득솔체도77%.안중국약전소백서량궐법측정득DTI적생물활력위22 IU/mg,시이도소적80%,재Superdex G-75분자사상측정DTI적해리취합곡선,증명기시단체.
