中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2007年
5期
657-660
,共4页
王方昆%王一成%袁秀芳%徐丽华
王方昆%王一成%袁秀芳%徐麗華
왕방곤%왕일성%원수방%서려화
猪胸膜肺炎放线杆菌%ApxⅣ%克隆%表达
豬胸膜肺炎放線桿菌%ApxⅣ%剋隆%錶達
저흉막폐염방선간균%ApxⅣ%극륭%표체
以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清2型标准菌株基因组DNA为模板,用PCR方法扩增ApxⅣ毒素基因特异片段1.5 kb左右,将PCR产物纯化后与pMD18-T连接并测序,结果该片段的碱基序列与GenBank中标准株序列的同源性为98%.随后将该片段亚克隆到原核表达载体pET-28a(+)的多克隆位点,经鉴定后得到重组质粒pET-ApxⅣ,将此重组质粒转化到受体菌BL21-DL3中,并用诱导剂乳糖进行诱导表达,5 h后表达达到高峰.经12%SDS-PAGE电泳检测,表达得到的融合蛋白约为61 000.经Western blotting分析,表达蛋白能与APP阳性血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应.
以豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌(APP)血清2型標準菌株基因組DNA為模闆,用PCR方法擴增ApxⅣ毒素基因特異片段1.5 kb左右,將PCR產物純化後與pMD18-T連接併測序,結果該片段的堿基序列與GenBank中標準株序列的同源性為98%.隨後將該片段亞剋隆到原覈錶達載體pET-28a(+)的多剋隆位點,經鑒定後得到重組質粒pET-ApxⅣ,將此重組質粒轉化到受體菌BL21-DL3中,併用誘導劑乳糖進行誘導錶達,5 h後錶達達到高峰.經12%SDS-PAGE電泳檢測,錶達得到的融閤蛋白約為61 000.經Western blotting分析,錶達蛋白能與APP暘性血清髮生特異性反應,而與陰性血清不反應.
이저전염성흉막폐염방선간균(APP)혈청2형표준균주기인조DNA위모판,용PCR방법확증ApxⅣ독소기인특이편단1.5 kb좌우,장PCR산물순화후여pMD18-T련접병측서,결과해편단적감기서렬여GenBank중표준주서렬적동원성위98%.수후장해편단아극륭도원핵표체재체pET-28a(+)적다극륭위점,경감정후득도중조질립pET-ApxⅣ,장차중조질립전화도수체균BL21-DL3중,병용유도제유당진행유도표체,5 h후표체체도고봉.경12%SDS-PAGE전영검측,표체득도적융합단백약위61 000.경Western blotting분석,표체단백능여APP양성혈청발생특이성반응,이여음성혈청불반응.
