CAJ | 학술논문

为了使T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)表达系统真核化,首先,利用两种方法建立能够表达T7 RNAP的真核细胞:(1)共转染表达T7 RNAP的真核表达重组质粒于靶细胞;(2)利用稳定表达T7 RNAP的BHK-21细胞系.然后,将FMDV内部核糖体进入位点(IRES)序列和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因定向克隆进原核载体pET-10a-c(+)的T7启动子下游,得到的重组质粒pIERS-EGFP-E.用该质粒分别转染上述两种细胞,在紫外显微镜下都能够观察到绿色荧光,表明真核化的T7 RNAP偶联表达系统建立.并利用流式细胞仪对偶联表达水平进行了分析.这为利用该系统真核高效表达外源蛋白奠定了坚实的基础.用实验证明了FMDV 5'端含有IERS具有介导非帽依赖性的翻译的功能,为以IERS为基础的双顺反子表达系统的建立及深入研究IERS与相关蛋白的功能奠定了基础.T7 RNAP偶联表达体系是一种良好的外源基因表达体系.
위료사T7 RNA취합매(T7 RNAP)표체계통진핵화,수선,이용량충방법건립능구표체T7 RNAP적진핵세포:(1)공전염표체T7 RNAP적진핵표체중조질립우파세포;(2)이용은정표체T7 RNAP적BHK-21세포계.연후,장FMDV내부핵당체진입위점(IRES)서렬화증강형록색형광단백(EGFP)기인정향극륭진원핵재체pET-10a-c(+)적T7계동자하유,득도적중조질립pIERS-EGFP-E.용해질립분별전염상술량충세포,재자외현미경하도능구관찰도록색형광,표명진핵화적T7 RNAP우련표체계통건립.병이용류식세포의대우련표체수평진행료분석.저위이용해계통진핵고효표체외원단백전정료견실적기출.용실험증명료FMDV 5'단함유IERS구유개도비모의뢰성적번역적공능,위이IERS위기출적쌍순반자표체계통적건립급심입연구IERS여상관단백적공능전정료기출.T7 RNAP우련표체체계시일충량호적외원기인표체체계.