CAJ | 학술논문

目的: 探讨不同的重组病毒载体对体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)的转染效率和外源基因表达水平,为利用骨髓间充质干细胞进行细胞和基因治疗提供实验依据. 方法: 采用淋巴细胞分离液、密度梯度离心及体外培养方法分离rMSCs,流式细胞仪检测细胞表面CD11b、CD45和CD90的表达鉴定细胞类型.进一步用携带绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的重组Ad5-EGFP、Ad5F35-EGFP、 rAAV1/2-EGFP、 rAAV2-EGFP及Lentivirus- EGFP转染体外培养的rMSCs,荧光显微镜观察、流式细胞仪检测EGFP阳性率和荧光强度. 结果: rMSCs细胞表面CD11b、CD45和CD90阳性率分别为(14.1±3.3)%、(1.1±0.4)% 和 (82.3±5.7)%.Ad5-EGFP按10、100和1 000 MOI转染 rMSCs,2 d后流式细胞仪检测,EGFP阳性率分别为(33.6±2.7)%、(88.6±1.0)%及(99.9±0.1)%,荧光强度为4.4±0.3、39.8±1.5及811.4±3.9;Ad5F35-EGFP按10、100和1 000 MOI转染 rMSCs,2 d后阳性率分别为(96.9±0.4)%、(99.9±0.1)%及(99.7±0.1)%,荧光平均强度为369.3±14.8、895.4±7.5及703.2±38.4;rAAV1/2-EGFP及rAAV2-EGFP按1×104和1×105 vg/细胞转染 rMSCs, 6 d后阳性率分别为(0.94±0.31)%及(1.30±0.36)%,和(2.16±0.38)%及(3.90±0.33)%;LV-EGFP按30 (TU/细胞)转染rMSCs,6 d后阳性率为(60.5±3.2)%,荧光强度为27.0±3.6. 结论: Ad5、Ad5F35及LV能够有效转染体外培养的rMSCs并表达外源基因,转染效率与病毒的用量间存在量效关系.
목적: 탐토불동적중조병독재체대체외배양적SD대서골수간충질간세포(rMSCs)적전염효솔화외원기인표체수평,위이용골수간충질간세포진행세포화기인치료제공실험의거. 방법: 채용림파세포분리액、밀도제도리심급체외배양방법분리rMSCs,류식세포의검측세포표면CD11b、CD45화CD90적표체감정세포류형.진일보용휴대록색형광단백(EGFP)보고기인적중조Ad5-EGFP、Ad5F35-EGFP、 rAAV1/2-EGFP、 rAAV2-EGFP급Lentivirus- EGFP전염체외배양적rMSCs,형광현미경관찰、류식세포의검측EGFP양성솔화형광강도. 결과: rMSCs세포표면CD11b、CD45화CD90양성솔분별위(14.1±3.3)%、(1.1±0.4)% 화 (82.3±5.7)%.Ad5-EGFP안10、100화1 000 MOI전염 rMSCs,2 d후류식세포의검측,EGFP양성솔분별위(33.6±2.7)%、(88.6±1.0)%급(99.9±0.1)%,형광강도위4.4±0.3、39.8±1.5급811.4±3.9;Ad5F35-EGFP안10、100화1 000 MOI전염 rMSCs,2 d후양성솔분별위(96.9±0.4)%、(99.9±0.1)%급(99.7±0.1)%,형광평균강도위369.3±14.8、895.4±7.5급703.2±38.4;rAAV1/2-EGFP급rAAV2-EGFP안1×104화1×105 vg/세포전염 rMSCs, 6 d후양성솔분별위(0.94±0.31)%급(1.30±0.36)%,화(2.16±0.38)%급(3.90±0.33)%;LV-EGFP안30 (TU/세포)전염rMSCs,6 d후양성솔위(60.5±3.2)%,형광강도위27.0±3.6. 결론: Ad5、Ad5F35급LV능구유효전염체외배양적rMSCs병표체외원기인,전염효솔여병독적용량간존재량효관계.