CAJ | 학술논문

目的:明确肿瘤坏死因子超家族成员在骨巨细胞瘤的表达及对其肿瘤细胞的作用,同时观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体联合干扰素γ作用于骨巨细胞瘤肿瘤细胞的效果.方法:实验于2005-01/2006-08在解放军总医院骨科研究所完成.①用免疫组织化学染色方法检测肿瘤坏死因子超家族成员核因子κB受体激活因子配基、核因子κB受体激活因子、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体、死亡受体4、死亡受体5、骨保护素等因子的表达.②骨保护素、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体、干扰素γ分别以不同的浓度作用于培养的骨巨细胞瘤肿瘤细胞24 h;随后用干扰素γ(1 000 U/mL)先诱导24 h再加入肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(100,200μg/L)作用于细胞24 h,用CCK-8方法来检测细胞存活率.③选取在药物合理浓度范围内有明显抑制作用的用药方式所作用的细胞,用流式细胞仪检测其凋亡率,倒置显微镜下观察细胞药物作用后的形态学改变.结果:①破骨细胞分化相关因子在细胞和组织水平的表达:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体、骨保护素、核因子κB受体激活因子配基在骨巨细胞瘤所有细胞成分内均有表达,死亡受体4,死亡受体5在多核巨细胞内强阳性表达,在梭型单核细胞表达强度较弱,部分标本内死亡受体4呈阴性表达.核因子κB受体激活因子仅在多核巨细胞内强阳性表达.②CCK-8检测药物作用后细胞抑制作用:骨保护素对肿瘤细胞无抑制作用,肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体仅在较高浓度时对肿瘤细胞有弱的抑制作用,干扰素γ对巨细胞瘤细胞抑制作用有浓度依赖性,当先以干扰素γ(1 000 U/mL)诱导24 h再加入肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(100,200tμg/L)共同作用24 h,细胞存活率明显下降.③凋亡分析:流式细胞检测发现干扰素γ(1 000 U/mL)诱导24 h再联合不同浓度肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(100,200 μg/L)作用后,凋亡率分别为(39.94±2.87)%,(48 32±3.33)%,倒置显微镜观察也可见明显的细胞抑制表现.结论:干扰素γ与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体序贯用药后在各自合理用药浓度范围内对骨巨细胞瘤肿瘤细胞的凋亡作用明显增强,为骨巨细胞瘤的治疗提供了一种全新的选择. 目的:明確腫瘤壞死因子超傢族成員在骨巨細胞瘤的錶達及對其腫瘤細胞的作用,同時觀察腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體聯閤榦擾素γ作用于骨巨細胞瘤腫瘤細胞的效果.方法:實驗于2005-01/2006-08在解放軍總醫院骨科研究所完成.①用免疫組織化學染色方法檢測腫瘤壞死因子超傢族成員覈因子κB受體激活因子配基、覈因子κB受體激活因子、腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體、死亡受體4、死亡受體5、骨保護素等因子的錶達.②骨保護素、腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體、榦擾素γ分彆以不同的濃度作用于培養的骨巨細胞瘤腫瘤細胞24 h;隨後用榦擾素γ(1 000 U/mL)先誘導24 h再加入腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(100,200μg/L)作用于細胞24 h,用CCK-8方法來檢測細胞存活率.③選取在藥物閤理濃度範圍內有明顯抑製作用的用藥方式所作用的細胞,用流式細胞儀檢測其凋亡率,倒置顯微鏡下觀察細胞藥物作用後的形態學改變.結果:①破骨細胞分化相關因子在細胞和組織水平的錶達:腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體、骨保護素、覈因子κB受體激活因子配基在骨巨細胞瘤所有細胞成分內均有錶達,死亡受體4,死亡受體5在多覈巨細胞內彊暘性錶達,在梭型單覈細胞錶達彊度較弱,部分標本內死亡受體4呈陰性錶達.覈因子κB受體激活因子僅在多覈巨細胞內彊暘性錶達.②CCK-8檢測藥物作用後細胞抑製作用:骨保護素對腫瘤細胞無抑製作用,腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體僅在較高濃度時對腫瘤細胞有弱的抑製作用,榦擾素γ對巨細胞瘤細胞抑製作用有濃度依賴性,噹先以榦擾素γ(1 000 U/mL)誘導24 h再加入腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(100,200tμg/L)共同作用24 h,細胞存活率明顯下降.③凋亡分析:流式細胞檢測髮現榦擾素γ(1 000 U/mL)誘導24 h再聯閤不同濃度腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(100,200 μg/L)作用後,凋亡率分彆為(39.94±2.87)%,(48 32±3.33)%,倒置顯微鏡觀察也可見明顯的細胞抑製錶現.結論:榦擾素γ與腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體序貫用藥後在各自閤理用藥濃度範圍內對骨巨細胞瘤腫瘤細胞的凋亡作用明顯增彊,為骨巨細胞瘤的治療提供瞭一種全新的選擇.
목적:명학종류배사인자초가족성원재골거세포류적표체급대기종류세포적작용,동시관찰종류배사인자상관조망유도배체연합간우소γ작용우골거세포류종류세포적효과.방법:실험우2005-01/2006-08재해방군총의원골과연구소완성.①용면역조직화학염색방법검측종류배사인자초가족성원핵인자κB수체격활인자배기、핵인자κB수체격활인자、종류배사인자상관조망유도배체、사망수체4、사망수체5、골보호소등인자적표체.②골보호소、종류배사인자상관조망유도배체、간우소γ분별이불동적농도작용우배양적골거세포류종류세포24 h;수후용간우소γ(1 000 U/mL)선유도24 h재가입종류배사인자상관조망유도배체(100,200μg/L)작용우세포24 h,용CCK-8방법래검측세포존활솔.③선취재약물합리농도범위내유명현억제작용적용약방식소작용적세포,용류식세포의검측기조망솔,도치현미경하관찰세포약물작용후적형태학개변.결과:①파골세포분화상관인자재세포화조직수평적표체:종류배사인자상관조망유도배체、골보호소、핵인자κB수체격활인자배기재골거세포류소유세포성분내균유표체,사망수체4,사망수체5재다핵거세포내강양성표체,재사형단핵세포표체강도교약,부분표본내사망수체4정음성표체.핵인자κB수체격활인자부재다핵거세포내강양성표체.②CCK-8검측약물작용후세포억제작용:골보호소대종류세포무억제작용,종류배사인자상관조망유도배체부재교고농도시대종류세포유약적억제작용,간우소γ대거세포류세포억제작용유농도의뢰성,당선이간우소γ(1 000 U/mL)유도24 h재가입종류배사인자상관조망유도배체(100,200tμg/L)공동작용24 h,세포존활솔명현하강.③조망분석:류식세포검측발현간우소γ(1 000 U/mL)유도24 h재연합불동농도종류배사인자상관조망유도배체(100,200 μg/L)작용후,조망솔분별위(39.94±2.87)%,(48 32±3.33)%,도치현미경관찰야가견명현적세포억제표현.결론:간우소γ여종류배사인자상관조망유도배체서관용약후재각자합리용약농도범위내대골거세포류종류세포적조망작용명현증강,위골거세포류적치료제공료일충전신적선택.