重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2006年
4期
335-338
,共4页
顾涛%罗福康%沈大斌%龚小云%郑红
顧濤%囉福康%瀋大斌%龔小雲%鄭紅
고도%라복강%침대빈%공소운%정홍
MIP-3 alpha%融合表达%pET32a(+)质粒%蛋白纯化
MIP-3 alpha%融閤錶達%pET32a(+)質粒%蛋白純化
MIP-3 alpha%융합표체%pET32a(+)질립%단백순화
目的克隆人趋化因子MIP-3 alpha基因,表达并初步纯化MIP-3 alpha融合蛋白.方法从人扁桃体中提取总RNA,再进行RT-PCR,扩增MIP-3 alpha成熟蛋白基因,并在5'和3'端分别添加NcoI和EcoRI酶切位点,通过与之对应的存在于pET32a(+)质粒上的酶切位点重组于pET32a(+)载体上,转化E.coli BL21trxB(DE3),筛选阳性克隆,酶切鉴定,DNA测序检测插入序列的正确性,缺失突变MIP-3 alpha序列前端多余碱基,获得MIP-3 alpha天然蛋白表达载体pET32a(+)/MIP-3 alpha,SDS-PAGE分析其表达,Westem Blot验证融合蛋白.大量表达并初步纯化MIP-3 alpha融合蛋白.结果成功克隆了MIP-3 alpha基因,表达并初步纯化得到MIP-3alpha融合蛋白.结论在大肠杆菌中成功构建的MIP-3 alpha硫氧还蛋白融合表达载体,以可溶性蛋白的方式表达MIP-3 alpha硫氧还蛋白.
目的剋隆人趨化因子MIP-3 alpha基因,錶達併初步純化MIP-3 alpha融閤蛋白.方法從人扁桃體中提取總RNA,再進行RT-PCR,擴增MIP-3 alpha成熟蛋白基因,併在5'和3'耑分彆添加NcoI和EcoRI酶切位點,通過與之對應的存在于pET32a(+)質粒上的酶切位點重組于pET32a(+)載體上,轉化E.coli BL21trxB(DE3),篩選暘性剋隆,酶切鑒定,DNA測序檢測插入序列的正確性,缺失突變MIP-3 alpha序列前耑多餘堿基,穫得MIP-3 alpha天然蛋白錶達載體pET32a(+)/MIP-3 alpha,SDS-PAGE分析其錶達,Westem Blot驗證融閤蛋白.大量錶達併初步純化MIP-3 alpha融閤蛋白.結果成功剋隆瞭MIP-3 alpha基因,錶達併初步純化得到MIP-3alpha融閤蛋白.結論在大腸桿菌中成功構建的MIP-3 alpha硫氧還蛋白融閤錶達載體,以可溶性蛋白的方式錶達MIP-3 alpha硫氧還蛋白.
목적극륭인추화인자MIP-3 alpha기인,표체병초보순화MIP-3 alpha융합단백.방법종인편도체중제취총RNA,재진행RT-PCR,확증MIP-3 alpha성숙단백기인,병재5'화3'단분별첨가NcoI화EcoRI매절위점,통과여지대응적존재우pET32a(+)질립상적매절위점중조우pET32a(+)재체상,전화E.coli BL21trxB(DE3),사선양성극륭,매절감정,DNA측서검측삽입서렬적정학성,결실돌변MIP-3 alpha서렬전단다여감기,획득MIP-3 alpha천연단백표체재체pET32a(+)/MIP-3 alpha,SDS-PAGE분석기표체,Westem Blot험증융합단백.대량표체병초보순화MIP-3 alpha융합단백.결과성공극륭료MIP-3 alpha기인,표체병초보순화득도MIP-3alpha융합단백.결론재대장간균중성공구건적MIP-3 alpha류양환단백융합표체재체,이가용성단백적방식표체MIP-3 alpha류양환단백.
