解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2006年
1期
113-116,101
,共5页
snail%融合蛋白%多克隆抗体%免疫荧光染色%免疫印迹法
snail%融閤蛋白%多剋隆抗體%免疫熒光染色%免疫印跡法
snail%융합단백%다극륭항체%면역형광염색%면역인적법
目的制备snail多克隆抗体,为深入研究其功能和探讨其与肿瘤等疾病的相关性提供工具.方法PCR扩增编码人snail 264个氨基酸的cDNA全长片段,DNA重组入原核表达质粒pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21菌株,异丙基-β-D-硫代半糖苷(IPTG)诱导表达GST/Snail融合蛋白.经电泳纯化的融合蛋白免疫新西兰白兔,制备抗血清.通过ELISA、免疫荧光和免疫印迹法鉴定血清特异性和效价.结果成功构建了pGEX-4T-1/snail原核表达载体,转化BL2l后可高效表达融合蛋白GST-snail,免疫产生的snail多抗可特异检测snail真核表达载体转染COS-7细胞后snail的表达及定位情况.结论获得了效价和特异性都良好的snail抗体,适合对snail的检测应用.
目的製備snail多剋隆抗體,為深入研究其功能和探討其與腫瘤等疾病的相關性提供工具.方法PCR擴增編碼人snail 264箇氨基痠的cDNA全長片段,DNA重組入原覈錶達質粒pGEX-4T-1,轉化大腸桿菌BL21菌株,異丙基-β-D-硫代半糖苷(IPTG)誘導錶達GST/Snail融閤蛋白.經電泳純化的融閤蛋白免疫新西蘭白兔,製備抗血清.通過ELISA、免疫熒光和免疫印跡法鑒定血清特異性和效價.結果成功構建瞭pGEX-4T-1/snail原覈錶達載體,轉化BL2l後可高效錶達融閤蛋白GST-snail,免疫產生的snail多抗可特異檢測snail真覈錶達載體轉染COS-7細胞後snail的錶達及定位情況.結論穫得瞭效價和特異性都良好的snail抗體,適閤對snail的檢測應用.
목적제비snail다극륭항체,위심입연구기공능화탐토기여종류등질병적상관성제공공구.방법PCR확증편마인snail 264개안기산적cDNA전장편단,DNA중조입원핵표체질립pGEX-4T-1,전화대장간균BL21균주,이병기-β-D-류대반당감(IPTG)유도표체GST/Snail융합단백.경전영순화적융합단백면역신서란백토,제비항혈청.통과ELISA、면역형광화면역인적법감정혈청특이성화효개.결과성공구건료pGEX-4T-1/snail원핵표체재체,전화BL2l후가고효표체융합단백GST-snail,면역산생적snail다항가특이검측snail진핵표체재체전염COS-7세포후snail적표체급정위정황.결론획득료효개화특이성도량호적snail항체,괄합대snail적검측응용.
