农垦医学
農墾醫學
농은의학
AGRICULTURAL RECLAMATION MEDICINE
2005年
5期
329-331
,共3页
罗星%何玲%张峪涵%孔雪%于娜%徐坚%杨磊%黄瑾
囉星%何玲%張峪涵%孔雪%于娜%徐堅%楊磊%黃瑾
라성%하령%장욕함%공설%우나%서견%양뢰%황근
BDNF%酵母双杂交%诱饵质粒
BDNF%酵母雙雜交%誘餌質粒
BDNF%효모쌍잡교%유이질립
目的:构建和转化脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的酵母诱饵重组质粒,为通过酵母双杂交研究BDNF的功能及作用机制奠定基础.方法:用PCR扩增BDNF基因cDNA中编码完整开放阅读框的基因片段;将该基因片段与plexA载体定向重组;用酶切和测序鉴定重组质粒;将核苷酸序列正确的重组质粒转化入EGY48(p8op-LacZ)酵母菌株.结果:成功构建pLexA-BDNF重组质粒.转化有重组质粒和pLexA空载体的两种EGY48(p8Op-LacZ)酵母都能在SD/Gal/Raf/-His/-Ura培养基中长成白色菌落(同时,转化pLexA-pos阳性对照质粒的酵母菌在相同条件下长成蓝色菌落),但都不能在SD/-His/-Leu/-Ura培养基中生长,在SD/-His/-Ura液中培养16h后,OD600均值均为0.9±0.1.这表明重组质粒表达的融合蛋白没有激活LEU2和lacZ酵母报告基因表达的活性,也没有酵母毒性作用.结论:构建的诱饵重组质粒可以用于下一阶段的人胎脑cDNA文库筛选.
目的:構建和轉化腦源性神經營養因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的酵母誘餌重組質粒,為通過酵母雙雜交研究BDNF的功能及作用機製奠定基礎.方法:用PCR擴增BDNF基因cDNA中編碼完整開放閱讀框的基因片段;將該基因片段與plexA載體定嚮重組;用酶切和測序鑒定重組質粒;將覈苷痠序列正確的重組質粒轉化入EGY48(p8op-LacZ)酵母菌株.結果:成功構建pLexA-BDNF重組質粒.轉化有重組質粒和pLexA空載體的兩種EGY48(p8Op-LacZ)酵母都能在SD/Gal/Raf/-His/-Ura培養基中長成白色菌落(同時,轉化pLexA-pos暘性對照質粒的酵母菌在相同條件下長成藍色菌落),但都不能在SD/-His/-Leu/-Ura培養基中生長,在SD/-His/-Ura液中培養16h後,OD600均值均為0.9±0.1.這錶明重組質粒錶達的融閤蛋白沒有激活LEU2和lacZ酵母報告基因錶達的活性,也沒有酵母毒性作用.結論:構建的誘餌重組質粒可以用于下一階段的人胎腦cDNA文庫篩選.
목적:구건화전화뇌원성신경영양인자(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)적효모유이중조질립,위통과효모쌍잡교연구BDNF적공능급작용궤제전정기출.방법:용PCR확증BDNF기인cDNA중편마완정개방열독광적기인편단;장해기인편단여plexA재체정향중조;용매절화측서감정중조질립;장핵감산서렬정학적중조질립전화입EGY48(p8op-LacZ)효모균주.결과:성공구건pLexA-BDNF중조질립.전화유중조질립화pLexA공재체적량충EGY48(p8Op-LacZ)효모도능재SD/Gal/Raf/-His/-Ura배양기중장성백색균락(동시,전화pLexA-pos양성대조질립적효모균재상동조건하장성람색균락),단도불능재SD/-His/-Leu/-Ura배양기중생장,재SD/-His/-Ura액중배양16h후,OD600균치균위0.9±0.1.저표명중조질립표체적융합단백몰유격활LEU2화lacZ효모보고기인표체적활성,야몰유효모독성작용.결론:구건적유이중조질립가이용우하일계단적인태뇌cDNA문고사선.
