CAJ | 학술논문

目的寻找与α1A-肾上腺素受体(α1A-AR)相互作用的胞浆内非G蛋白,研究蛋白对受体信号转导的影响.方法应用酵母双杂交技术,以人α1A-AR胞浆内C末端(α1A-AR-CT)为诱饵,筛选人脑cDNA文库,用5-溴-4-氯-3-吲哚半乳糖苷(X-Gal)定性分析及邻硝基苯基β-D-半乳糖苷(ONPG)定量分析对筛选出的阳性克隆细丝蛋白-C(FLN C)进行确证.采用脂质体转染及蛋白免疫印迹技术探讨人胚胎肾293(HEK293)细胞中FLN C对α1A-AR信号转导通路的影响.结果①缺陷培养基筛选出FLN C的C末端部分片段可以与α1A-AR-CT在酵母中结合.②X-Gal定性分析中,FLN C与α1A-AR-CT的共转子菌落6 h即呈现蓝色,而对照菌落颜色无变化;经ONPG定量分析发现,FLN C与α1A-AR-CT的共转子中β-半乳糖苷酶的活性大约是对照的2～3倍(P<0.01).③编码FLN C的C末端片段的质粒瞬时转染于稳定表达全长α1A-AR的HEK293细胞中,可以明显增强去氧肾上腺素(10 μmol*L-1,30 min)激动α1A-AR介导的细胞外信号调节激酶(ERK1/2)磷酸化作用.结论 FLN C的C末端部分片段可以与α1A-AR-CT在酵母中结合,并且增强HEK293细胞中α1A-AR介导ERK1/2磷酸化的作用.
목적심조여α1A-신상선소수체(α1A-AR)상호작용적포장내비G단백,연구단백대수체신호전도적영향.방법응용효모쌍잡교기술,이인α1A-AR포장내C말단(α1A-AR-CT)위유이,사선인뇌cDNA문고,용5-추-4-록-3-신타반유당감(X-Gal)정성분석급린초기분기β-D-반유당감(ONPG)정량분석대사선출적양성극륭세사단백-C(FLN C)진행학증.채용지질체전염급단백면역인적기술탐토인배태신293(HEK293)세포중FLN C대α1A-AR신호전도통로적영향.결과①결함배양기사선출FLN C적C말단부분편단가이여α1A-AR-CT재효모중결합.②X-Gal정성분석중,FLN C여α1A-AR-CT적공전자균락6 h즉정현람색,이대조균락안색무변화;경ONPG정량분석발현,FLN C여α1A-AR-CT적공전자중β-반유당감매적활성대약시대조적2～3배(P<0.01).③편마FLN C적C말단편단적질립순시전염우은정표체전장α1A-AR적HEK293세포중,가이명현증강거양신상선소(10 μmol*L-1,30 min)격동α1A-AR개도적세포외신호조절격매(ERK1/2)린산화작용.결론 FLN C적C말단부분편단가이여α1A-AR-CT재효모중결합,병차증강HEK293세포중α1A-AR개도ERK1/2린산화적작용.