上海农业学报
上海農業學報
상해농업학보
ACTA AGRICULTURAE SHANGHAI
2003年
1期
6-10
,共5页
熊爱生%彭日荷%李贤%范惠琴%姚泉洪
熊愛生%彭日荷%李賢%範惠琴%姚泉洪
웅애생%팽일하%리현%범혜금%요천홍
拟南芥%热激因子基因%克隆%转基因烟草
擬南芥%熱激因子基因%剋隆%轉基因煙草
의남개%열격인자기인%극륭%전기인연초
拟南芥热激因子是一重要的耐热基因.从拟南芥幼苗中提取总RNA,根据报道设计引物,利用RT-PCR的方法扩增出大约1.4kb的拟南芥热激因子基因Athsfc.将其克隆入pBluescript SK载体的XbaⅠ和SacI位点,测序结果显示核苷酸序列与国外Hübel(1994)报道的Athsf1基因间99.8%同源,只有3个核苷酸不同.序列分析显示,编码相同的氨基酸.将该基因构建入含内含子Km筛选标记的植物双元表达载体pYP1203E中,构成了拟南芥热激因子基因Athsfc植物表达载体pYP1203E(Athsfc).利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)对烟草进行Athsfc基因的转化,获得了GUS染色显示阳性的烟草转基因植株,经过PCR和PCR southern blot分子检测证明了转基因植株为阳性.
擬南芥熱激因子是一重要的耐熱基因.從擬南芥幼苗中提取總RNA,根據報道設計引物,利用RT-PCR的方法擴增齣大約1.4kb的擬南芥熱激因子基因Athsfc.將其剋隆入pBluescript SK載體的XbaⅠ和SacI位點,測序結果顯示覈苷痠序列與國外Hübel(1994)報道的Athsf1基因間99.8%同源,隻有3箇覈苷痠不同.序列分析顯示,編碼相同的氨基痠.將該基因構建入含內含子Km篩選標記的植物雙元錶達載體pYP1203E中,構成瞭擬南芥熱激因子基因Athsfc植物錶達載體pYP1203E(Athsfc).利用根癌農桿菌(Agrobacterium tumefaciens)對煙草進行Athsfc基因的轉化,穫得瞭GUS染色顯示暘性的煙草轉基因植株,經過PCR和PCR southern blot分子檢測證明瞭轉基因植株為暘性.
의남개열격인자시일중요적내열기인.종의남개유묘중제취총RNA,근거보도설계인물,이용RT-PCR적방법확증출대약1.4kb적의남개열격인자기인Athsfc.장기극륭입pBluescript SK재체적XbaⅠ화SacI위점,측서결과현시핵감산서렬여국외Hübel(1994)보도적Athsf1기인간99.8%동원,지유3개핵감산불동.서렬분석현시,편마상동적안기산.장해기인구건입함내함자Km사선표기적식물쌍원표체재체pYP1203E중,구성료의남개열격인자기인Athsfc식물표체재체pYP1203E(Athsfc).이용근암농간균(Agrobacterium tumefaciens)대연초진행Athsfc기인적전화,획득료GUS염색현시양성적연초전기인식주,경과PCR화PCR southern blot분자검측증명료전기인식주위양성.
