药物生物技术
藥物生物技術
약물생물기술
PHARMACEUTICAL BIOTECHNOLOGY
2002年
3期
123-127
,共5页
可溶性受体Flt-1%甲醇酵母%基因表达
可溶性受體Flt-1%甲醇酵母%基因錶達
가용성수체Flt-1%갑순효모%기인표체
应用RT-PCR技术,从人脐静脉内皮细胞中扩增出编码Flt-l胞外区前四个结构域的基因片段,将Flt-1基因片段连接到表达载体pPIC9K上,获得重组质粒pPIC9K-F,将重组质粒转化到甲醇酵母Pichia pastorisGS 115中,得到基因工程菌株P.pastoris(pPIC9K-F),对培养上清进行SDS-PAGE和Westem blot分析.结果显示在74.2 ku处有阳性条带出现,表明sFLT-1在甲醇酵母中获得了成功表达.受体配基结合实验显示表达产物与VEGF可特异性结合,表明其具有配基结合生物活性.
應用RT-PCR技術,從人臍靜脈內皮細胞中擴增齣編碼Flt-l胞外區前四箇結構域的基因片段,將Flt-1基因片段連接到錶達載體pPIC9K上,穫得重組質粒pPIC9K-F,將重組質粒轉化到甲醇酵母Pichia pastorisGS 115中,得到基因工程菌株P.pastoris(pPIC9K-F),對培養上清進行SDS-PAGE和Westem blot分析.結果顯示在74.2 ku處有暘性條帶齣現,錶明sFLT-1在甲醇酵母中穫得瞭成功錶達.受體配基結閤實驗顯示錶達產物與VEGF可特異性結閤,錶明其具有配基結閤生物活性.
응용RT-PCR기술,종인제정맥내피세포중확증출편마Flt-l포외구전사개결구역적기인편단,장Flt-1기인편단련접도표체재체pPIC9K상,획득중조질립pPIC9K-F,장중조질립전화도갑순효모Pichia pastorisGS 115중,득도기인공정균주P.pastoris(pPIC9K-F),대배양상청진행SDS-PAGE화Westem blot분석.결과현시재74.2 ku처유양성조대출현,표명sFLT-1재갑순효모중획득료성공표체.수체배기결합실험현시표체산물여VEGF가특이성결합,표명기구유배기결합생물활성.
