CAJ | 학술논문

目的:获得重组ESAT6蛋白,研究其免疫学特性,评价其在结核病血清学诊断中的价值.方法:分别用生理盐水和卡介苗免疫小鼠8周后,以结核分支杆菌接种小鼠.应用基因工程技术表达、纯化ESAT6蛋白,分别以结核分支杆菌PPD或纯化的rESAT6蛋白为抗原,通过ELISA方法及结核病一步法检测小鼠或人血清中抗结核抗体.结果:重组质粒pET24b-ESAT6在大肠杆菌BL2(DE3)细胞内以包涵体形式存在,分子量约6kDa,每100ml培养菌可获得约18mg纯化的重组蛋白.生理盐水和卡介苗免疫小鼠血后血清中抗ESAT6抗体无区别;结核分支杆菌攻击后,两组小鼠血清中抗ESAT6抗体均明显升高,但只有卡介苗组小鼠抗体水平超过平均值+2标准误.以33例正常人血清的OD值+2S为正常界限值,33例正常人和32例结核病人血清一步法和PDD、rESAT6 ELISA检测抗结核抗体的特异性和敏感性分别为:一步法87.9%(29/33)、65.6%(21/32);PPD 93.9%(31/33)、62.5%(20/32);rESAT6 97%(32/33)、18.2%(4/32).结论:pET24b-ESAT6大肠杆菌工程菌能以包涵形式高效表达重组ESAT6蛋白,卡介苗免疫对血清中抗ESAT6抗体无影响,结核病人血清中抗ESAT6抗体阳性率低,rESAT6纯化蛋白可作为结核病血清学诊断的混合抗原之一.
목적:획득중조ESAT6단백,연구기면역학특성,평개기재결핵병혈청학진단중적개치.방법:분별용생리염수화잡개묘면역소서8주후,이결핵분지간균접충소서.응용기인공정기술표체、순화ESAT6단백,분별이결핵분지간균PPD혹순화적rESAT6단백위항원,통과ELISA방법급결핵병일보법검측소서혹인혈청중항결핵항체.결과:중조질립pET24b-ESAT6재대장간균BL2(DE3)세포내이포함체형식존재,분자량약6kDa,매100ml배양균가획득약18mg순화적중조단백.생리염수화잡개묘면역소서혈후혈청중항ESAT6항체무구별;결핵분지간균공격후,량조소서혈청중항ESAT6항체균명현승고,단지유잡개묘조소서항체수평초과평균치+2표준오.이33례정상인혈청적OD치+2S위정상계한치,33례정상인화32례결핵병인혈청일보법화PDD、rESAT6 ELISA검측항결핵항체적특이성화민감성분별위:일보법87.9%(29/33)、65.6%(21/32);PPD 93.9%(31/33)、62.5%(20/32);rESAT6 97%(32/33)、18.2%(4/32).결론:pET24b-ESAT6대장간균공정균능이포함형식고효표체중조ESAT6단백,잡개묘면역대혈청중항ESAT6항체무영향,결핵병인혈청중항ESAT6항체양성솔저,rESAT6순화단백가작위결핵병혈청학진단적혼합항원지일.