化学学报
化學學報
화학학보
ACTA CHIMICA SINICA
2001年
10期
1813-1817
,共5页
王艳茹%任宏伟%纪建国%李令媛%茹炳根
王豔茹%任宏偉%紀建國%李令媛%茹炳根
왕염여%임굉위%기건국%리령원%여병근
三叶因子3%突变体%表达%活力
三葉因子3%突變體%錶達%活力
삼협인자3%돌변체%표체%활력
利用基因工程方法在大肠杆菌-酵母穿梭质粒pPIC9K上构建了人三叶因子3(Human Trefoil Factor 3,hTFF3)双结构域突变体基因,采用毕氏酵母表达系统对目的基因进行了分泌表达.经S-Sepharose,Q-Sepharose,SephacrylS-100纯化后得到突变体蛋白,主要以单体形式存在.SDS-PAGE表明重组蛋白分子量约为12 000,并在Westernblotting印迹实验中证明能被抗hTFF3抗体所识别,N-端氨基酸测序与天然hTFF3一致,质谱检测纯化的蛋白出现单体和双本两种形式.用重组蛋白对乙醇诱导的大鼠胃溃疡进行实验治疗表明hTFF3双体突变体与天然形成的双本蛋同具有相同的活力,并且活力高于单体形式的hTFF3.
利用基因工程方法在大腸桿菌-酵母穿梭質粒pPIC9K上構建瞭人三葉因子3(Human Trefoil Factor 3,hTFF3)雙結構域突變體基因,採用畢氏酵母錶達繫統對目的基因進行瞭分泌錶達.經S-Sepharose,Q-Sepharose,SephacrylS-100純化後得到突變體蛋白,主要以單體形式存在.SDS-PAGE錶明重組蛋白分子量約為12 000,併在Westernblotting印跡實驗中證明能被抗hTFF3抗體所識彆,N-耑氨基痠測序與天然hTFF3一緻,質譜檢測純化的蛋白齣現單體和雙本兩種形式.用重組蛋白對乙醇誘導的大鼠胃潰瘍進行實驗治療錶明hTFF3雙體突變體與天然形成的雙本蛋同具有相同的活力,併且活力高于單體形式的hTFF3.
이용기인공정방법재대장간균-효모천사질립pPIC9K상구건료인삼협인자3(Human Trefoil Factor 3,hTFF3)쌍결구역돌변체기인,채용필씨효모표체계통대목적기인진행료분비표체.경S-Sepharose,Q-Sepharose,SephacrylS-100순화후득도돌변체단백,주요이단체형식존재.SDS-PAGE표명중조단백분자량약위12 000,병재Westernblotting인적실험중증명능피항hTFF3항체소식별,N-단안기산측서여천연hTFF3일치,질보검측순화적단백출현단체화쌍본량충형식.용중조단백대을순유도적대서위궤양진행실험치료표명hTFF3쌍체돌변체여천연형성적쌍본단동구유상동적활력,병차활력고우단체형식적hTFF3.
