CAJ | 학술논문

目的:建立成年大鼠胰腺非胰岛内Nestin阳性细胞的体外分离培养及分化的方法.方法:采用胰管内注入胶原酶消化法分离3只成年大鼠胰腺组织,并经含10%胎牛血清RPMI 1640液(pH 7.6)体外培养,36 h后弃去悬浮细胞及胰岛,改用无10%胎牛血清RPMI 1640液(pH 7.4)加bFGF、EGF及N2添加剂培养,18～22 d后收集新生类胰岛样细胞团并传代培养.挑选新分离的胰岛和新生类胰岛样细胞团每次各40个,共3次,采用131 I放射免疫法测定分离的胰岛及新生类胰岛样细胞团的胰岛素分泌量,并计算葡萄糖刺激指数(SI);免疫荧光细胞化学法检查贴壁细胞及传代后的新生类胰岛样细胞团Nestin阳性细胞的表达.结果:胰管内注入胶原酶消化法可获得功能、形态良好的胰岛;分离后胰腺组织在pH 7.6的10%胎牛血清RPMI 1640液培养条件下,36 h内胰岛细胞不贴壁,贴壁细胞中大多数表达Nestin阳性细胞,无胰岛素和胰高血糖素表达,但Nestin表达不一,培养18～22 d可见新生类胰岛样细胞团出现,新生类胰岛样细胞团传代后仍可见Nestin阳性细胞.新分离的40个胰岛在含糖3.3、16.7 mmol·L-1培养液中胰岛素分泌量为(63.6±4.0)、(202.2±14.8)mIU·L-1;而新生的40个类胰岛样细胞团胰岛素分泌量为(3.5±0.2)、(3.3±0.2)mIU·L-1,差异有显著性(P＜0.001).结论:胰管内注入胶原酶消化法可获得功能、形态良好的胰岛;在pH 7.6条件下可分离培养出成年大鼠胰腺非胰岛内Nestin阳性细胞,经无血清培养形成的类胰岛样细胞团,可传代培养,并表达胰岛素.胰腺非胰岛内Nestin阳性细胞具有胰腺干细胞特点.
목적:건립성년대서이선비이도내Nestin양성세포적체외분리배양급분화적방법.방법:채용이관내주입효원매소화법분리3지성년대서이선조직,병경함10%태우혈청RPMI 1640액(pH 7.6)체외배양,36 h후기거현부세포급이도,개용무10%태우혈청RPMI 1640액(pH 7.4)가bFGF、EGF급N2첨가제배양,18～22 d후수집신생류이도양세포단병전대배양.도선신분리적이도화신생류이도양세포단매차각40개,공3차,채용131 I방사면역법측정분리적이도급신생류이도양세포단적이도소분비량,병계산포도당자격지수(SI);면역형광세포화학법검사첩벽세포급전대후적신생류이도양세포단Nestin양성세포적표체.결과:이관내주입효원매소화법가획득공능、형태량호적이도;분리후이선조직재pH 7.6적10%태우혈청RPMI 1640액배양조건하,36 h내이도세포불첩벽,첩벽세포중대다수표체Nestin양성세포,무이도소화이고혈당소표체,단Nestin표체불일,배양18～22 d가견신생류이도양세포단출현,신생류이도양세포단전대후잉가견Nestin양성세포.신분리적40개이도재함당3.3、16.7 mmol·L-1배양액중이도소분비량위(63.6±4.0)、(202.2±14.8)mIU·L-1;이신생적40개류이도양세포단이도소분비량위(3.5±0.2)、(3.3±0.2)mIU·L-1,차이유현저성(P＜0.001).결론:이관내주입효원매소화법가획득공능、형태량호적이도;재pH 7.6조건하가분리배양출성년대서이선비이도내Nestin양성세포,경무혈청배양형성적류이도양세포단,가전대배양,병표체이도소.이선비이도내Nestin양성세포구유이선간세포특점.