四川大学学报（医学版）
四川大學學報（醫學版）
사천대학학보（의학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2009年
1期
153-156
,共4页
胰岛β细胞%细胞的分离纯化%原代培养
胰島β細胞%細胞的分離純化%原代培養
이도β세포%세포적분리순화%원대배양
目的 探索胰岛B细胞分离纯化方法和适宜的原代培养条件.方法 正常Wistar大鼠,胶原酶消化及网筛过滤初步纯化胰岛,双硫腙染色及葡萄糖刺激实验鉴定胰岛及其活性.胰岛以胰蛋白酶和DNA酶消化成单细胞悬液,在2.8 mmol/L葡萄糖条件下,用荧光激活流式细胞分选(FACS)β细胞.免疫组化法及葡萄糖刺激实验鉴定分选的β细胞及其活性,所分选β细胞置于不同浓度葡萄糖和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)50μmol/L浓度的Ham's F-10培养基中培养24 h,观察不同浓度葡萄糖及IBMX对β细胞活性的影响.结果 可获(550±95)个胰岛/只大鼠,活性良好.FACS后,可得约5688个β细胞/只大鼠,回收率(93.69±1.26)%,纯度(85.5±1.24)%.原代培养24 h后,10.0 mmol/L及16.0 mmol/L葡萄糖中β细胞活性较高,死亡和凋亡也较少.结论 胰岛的单细胞悬液,在外界葡萄糖浓度为2.8 mmol/L时可以FACS对β细胞进行分选纯化;原代培养24 h后,在外界葡萄糖浓度10.0～16.0 mmol/L时,β细胞有较高存活率和活性.
目的 探索胰島B細胞分離純化方法和適宜的原代培養條件.方法 正常Wistar大鼠,膠原酶消化及網篩過濾初步純化胰島,雙硫腙染色及葡萄糖刺激實驗鑒定胰島及其活性.胰島以胰蛋白酶和DNA酶消化成單細胞懸液,在2.8 mmol/L葡萄糖條件下,用熒光激活流式細胞分選(FACS)β細胞.免疫組化法及葡萄糖刺激實驗鑒定分選的β細胞及其活性,所分選β細胞置于不同濃度葡萄糖和3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(IBMX)50μmol/L濃度的Ham's F-10培養基中培養24 h,觀察不同濃度葡萄糖及IBMX對β細胞活性的影響.結果 可穫(550±95)箇胰島/隻大鼠,活性良好.FACS後,可得約5688箇β細胞/隻大鼠,迴收率(93.69±1.26)%,純度(85.5±1.24)%.原代培養24 h後,10.0 mmol/L及16.0 mmol/L葡萄糖中β細胞活性較高,死亡和凋亡也較少.結論 胰島的單細胞懸液,在外界葡萄糖濃度為2.8 mmol/L時可以FACS對β細胞進行分選純化;原代培養24 h後,在外界葡萄糖濃度10.0～16.0 mmol/L時,β細胞有較高存活率和活性.
목적 탐색이도B세포분리순화방법화괄의적원대배양조건.방법 정상Wistar대서,효원매소화급망사과려초보순화이도,쌍류종염색급포도당자격실험감정이도급기활성.이도이이단백매화DNA매소화성단세포현액,재2.8 mmol/L포도당조건하,용형광격활류식세포분선(FACS)β세포.면역조화법급포도당자격실험감정분선적β세포급기활성,소분선β세포치우불동농도포도당화3-이정기-1-갑기황표령(IBMX)50μmol/L농도적Ham's F-10배양기중배양24 h,관찰불동농도포도당급IBMX대β세포활성적영향.결과 가획(550±95)개이도/지대서,활성량호.FACS후,가득약5688개β세포/지대서,회수솔(93.69±1.26)%,순도(85.5±1.24)%.원대배양24 h후,10.0 mmol/L급16.0 mmol/L포도당중β세포활성교고,사망화조망야교소.결론 이도적단세포현액,재외계포도당농도위2.8 mmol/L시가이FACS대β세포진행분선순화;원대배양24 h후,재외계포도당농도10.0～16.0 mmol/L시,β세포유교고존활솔화활성.
