大豆科学
大豆科學
대두과학
SOYBEAN SCIENCE
2010年
2期
186-190
,共5页
林苏霞%王晓梅%刘志刚%曾梦雅%吴研%陈家杰
林囌霞%王曉梅%劉誌剛%曾夢雅%吳研%陳傢傑
림소하%왕효매%류지강%증몽아%오연%진가걸
大豆主要过敏原%Gly m Bd 30k%抗原表位区%基因克隆
大豆主要過敏原%Gly m Bd 30k%抗原錶位區%基因剋隆
대두주요과민원%Gly m Bd 30k%항원표위구%기인극륭
根据文献并结合生物信息学方法选取大豆主要过敏原Gly m Bd 30k的抗原表位区,采用PCR方法扩增出该抗原表位区基因片段,并通过酶切连接分别构建单体的pET表达载体(pET-sGly)和二聚体的pET表达载体(pET-dGly),重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)plysS,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE分析;同时用Ni2+离子亲和层析柱纯化表达的sGly和dGly抗原表位蛋白,用western-blotting和ELISA检测重组蛋白的免疫原性.结果表明:表达的单体sGly蛋白以可溶性表达为主,而其二聚体dGly蛋白以包涵体形式存在,纯化的sGly和dGly蛋白都具有较好的免疫原性,重组蛋白sGly的抗原性更佳.成功构建的大豆主要过敏原Gly m Bd 30k蛋白的抗原表位区单体sGly蛋白及其二聚体dGly蛋白的工程菌, 为研制大豆主要过敏原的单克隆抗体以制备用于大豆主要过敏原检测的试剂奠定了基础.
根據文獻併結閤生物信息學方法選取大豆主要過敏原Gly m Bd 30k的抗原錶位區,採用PCR方法擴增齣該抗原錶位區基因片段,併通過酶切連接分彆構建單體的pET錶達載體(pET-sGly)和二聚體的pET錶達載體(pET-dGly),重組質粒轉化到大腸桿菌BL21(DE3)plysS,經IPTG誘導後進行SDS-PAGE分析;同時用Ni2+離子親和層析柱純化錶達的sGly和dGly抗原錶位蛋白,用western-blotting和ELISA檢測重組蛋白的免疫原性.結果錶明:錶達的單體sGly蛋白以可溶性錶達為主,而其二聚體dGly蛋白以包涵體形式存在,純化的sGly和dGly蛋白都具有較好的免疫原性,重組蛋白sGly的抗原性更佳.成功構建的大豆主要過敏原Gly m Bd 30k蛋白的抗原錶位區單體sGly蛋白及其二聚體dGly蛋白的工程菌, 為研製大豆主要過敏原的單剋隆抗體以製備用于大豆主要過敏原檢測的試劑奠定瞭基礎.
근거문헌병결합생물신식학방법선취대두주요과민원Gly m Bd 30k적항원표위구,채용PCR방법확증출해항원표위구기인편단,병통과매절련접분별구건단체적pET표체재체(pET-sGly)화이취체적pET표체재체(pET-dGly),중조질립전화도대장간균BL21(DE3)plysS,경IPTG유도후진행SDS-PAGE분석;동시용Ni2+리자친화층석주순화표체적sGly화dGly항원표위단백,용western-blotting화ELISA검측중조단백적면역원성.결과표명:표체적단체sGly단백이가용성표체위주,이기이취체dGly단백이포함체형식존재,순화적sGly화dGly단백도구유교호적면역원성,중조단백sGly적항원성경가.성공구건적대두주요과민원Gly m Bd 30k단백적항원표위구단체sGly단백급기이취체dGly단백적공정균, 위연제대두주요과민원적단극륭항체이제비용우대두주요과민원검측적시제전정료기출.
