中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2011年
4期
352-355
,共4页
易海涛%刘志刚%刘芳%闫浩%汤慕瑾%肖小军%夏立新
易海濤%劉誌剛%劉芳%閆浩%湯慕瑾%肖小軍%夏立新
역해도%류지강%류방%염호%탕모근%초소군%하립신
花生%过敏原%Ara h 8%克隆表达%纯化%免疫印迹
花生%過敏原%Ara h 8%剋隆錶達%純化%免疫印跡
화생%과민원%Ara h 8%극륭표체%순화%면역인적
目的:克隆花生主要过敏原Ara h 8基因,表达并纯化该蛋白,检测其免疫活性.方法:提取花生总RNA,设计特异性引物,RT-PCR克隆花生Ara h 8基因;将反转录的基因连入pMD19-T Simple Vector,提质粒酶切鉴定并测序.将测序正确的片段连入原核表达载体pET-32a(+)上,并转入BL21(DE3)宿主表达菌中;IPTG诱导表达;通过Ni2+亲和层析(FPLC)纯化目的蛋白Ara h 8;Western blot检测该重组蛋白的免疫原性.结果:测序结果表明克隆的花生Ara h 8基因片段全长为474 bp,编码157个氨基酸,与GenBank中蛋白序列100%相同.重组蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符.Western blot结果表明该蛋白与花生过敏病人混合血清中IgE结合,具有免疫原性.结论:成功克隆并表达纯化了花生过敏原Ara h 8,该基因表达的重组蛋白具有良好的免疫原性.
目的:剋隆花生主要過敏原Ara h 8基因,錶達併純化該蛋白,檢測其免疫活性.方法:提取花生總RNA,設計特異性引物,RT-PCR剋隆花生Ara h 8基因;將反轉錄的基因連入pMD19-T Simple Vector,提質粒酶切鑒定併測序.將測序正確的片段連入原覈錶達載體pET-32a(+)上,併轉入BL21(DE3)宿主錶達菌中;IPTG誘導錶達;通過Ni2+親和層析(FPLC)純化目的蛋白Ara h 8;Western blot檢測該重組蛋白的免疫原性.結果:測序結果錶明剋隆的花生Ara h 8基因片段全長為474 bp,編碼157箇氨基痠,與GenBank中蛋白序列100%相同.重組蛋白純化後經SDS-PAGE鑒定,目的蛋白大小與理論值相符.Western blot結果錶明該蛋白與花生過敏病人混閤血清中IgE結閤,具有免疫原性.結論:成功剋隆併錶達純化瞭花生過敏原Ara h 8,該基因錶達的重組蛋白具有良好的免疫原性.
목적:극륭화생주요과민원Ara h 8기인,표체병순화해단백,검측기면역활성.방법:제취화생총RNA,설계특이성인물,RT-PCR극륭화생Ara h 8기인;장반전록적기인련입pMD19-T Simple Vector,제질립매절감정병측서.장측서정학적편단련입원핵표체재체pET-32a(+)상,병전입BL21(DE3)숙주표체균중;IPTG유도표체;통과Ni2+친화층석(FPLC)순화목적단백Ara h 8;Western blot검측해중조단백적면역원성.결과:측서결과표명극륭적화생Ara h 8기인편단전장위474 bp,편마157개안기산,여GenBank중단백서렬100%상동.중조단백순화후경SDS-PAGE감정,목적단백대소여이론치상부.Western blot결과표명해단백여화생과민병인혼합혈청중IgE결합,구유면역원성.결론:성공극륭병표체순화료화생과민원Ara h 8,해기인표체적중조단백구유량호적면역원성.
