中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2012年
6期
493-496,511
,共5页
谢军平%李环羽%高亭%王石生%颜春松%况九龙
謝軍平%李環羽%高亭%王石生%顏春鬆%況九龍
사군평%리배우%고정%왕석생%안춘송%황구룡
基因转移%livin a%重组腺病毒%增强的绿色荧光蛋白%树突状细胞
基因轉移%livin a%重組腺病毒%增彊的綠色熒光蛋白%樹突狀細胞
기인전이%livin a%중조선병독%증강적록색형광단백%수돌상세포
目的:本研究旨在利用AdMax系统构建携带人抗凋亡基因livin α的重组腺病毒载体(rAd-livin α),并感染树突状细胞(Dendritic cells,DCs),制成DCs疫苗,为下一步用此疫苗抗肿瘤实验奠定基础.方法:以质粒pIRES2-EGFP-livin α为模板,通过PCR扩增出人livin α基因cDNA序列,再将livin α基因cDNA亚克隆于穿梭质粒pDC316-EGFP-cmv,获得重组质粒pDC316-EGFP-cmv-livin α.将鉴定后的重组穿梭质粒pDC316-EGFP-cmv-livin α与腺病毒辅助质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染HEK293细胞,同源重组获得重组腺病毒rAd-livin α.用重组腺病毒rAd-livin α感染人DCs后,Western blot方法分析livin α蛋白表达,流式细胞仪检测DCs的表型变化.结果:在HEK293细胞内能观察到重组腺病毒rAd-livin α绿色荧光蛋白的表达.rAd-livin α 经PCR鉴定特异性地扩增出符合预期大小的片段.rAd-livin α感染的DCs中可检测到livin α蛋白的表达,并且感染的DCs与未感染DCs比较,可明显提高了细胞表面分子CD83、CD86和HLA-DR的表达(P<0.05).结论:通过AdMax系统成功构建了重组腺病毒rAd-livin α,使livin α蛋白有效表达于DCs中,并且重组腺病毒感染的DCs的成熟度得到提高.
目的:本研究旨在利用AdMax繫統構建攜帶人抗凋亡基因livin α的重組腺病毒載體(rAd-livin α),併感染樹突狀細胞(Dendritic cells,DCs),製成DCs疫苗,為下一步用此疫苗抗腫瘤實驗奠定基礎.方法:以質粒pIRES2-EGFP-livin α為模闆,通過PCR擴增齣人livin α基因cDNA序列,再將livin α基因cDNA亞剋隆于穿梭質粒pDC316-EGFP-cmv,穫得重組質粒pDC316-EGFP-cmv-livin α.將鑒定後的重組穿梭質粒pDC316-EGFP-cmv-livin α與腺病毒輔助質粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共轉染HEK293細胞,同源重組穫得重組腺病毒rAd-livin α.用重組腺病毒rAd-livin α感染人DCs後,Western blot方法分析livin α蛋白錶達,流式細胞儀檢測DCs的錶型變化.結果:在HEK293細胞內能觀察到重組腺病毒rAd-livin α綠色熒光蛋白的錶達.rAd-livin α 經PCR鑒定特異性地擴增齣符閤預期大小的片段.rAd-livin α感染的DCs中可檢測到livin α蛋白的錶達,併且感染的DCs與未感染DCs比較,可明顯提高瞭細胞錶麵分子CD83、CD86和HLA-DR的錶達(P<0.05).結論:通過AdMax繫統成功構建瞭重組腺病毒rAd-livin α,使livin α蛋白有效錶達于DCs中,併且重組腺病毒感染的DCs的成熟度得到提高.
목적:본연구지재이용AdMax계통구건휴대인항조망기인livin α적중조선병독재체(rAd-livin α),병감염수돌상세포(Dendritic cells,DCs),제성DCs역묘,위하일보용차역묘항종류실험전정기출.방법:이질립pIRES2-EGFP-livin α위모판,통과PCR확증출인livin α기인cDNA서렬,재장livin α기인cDNA아극륭우천사질립pDC316-EGFP-cmv,획득중조질립pDC316-EGFP-cmv-livin α.장감정후적중조천사질립pDC316-EGFP-cmv-livin α여선병독보조질립pBHGlox(delta)E1,3Cre공전염HEK293세포,동원중조획득중조선병독rAd-livin α.용중조선병독rAd-livin α감염인DCs후,Western blot방법분석livin α단백표체,류식세포의검측DCs적표형변화.결과:재HEK293세포내능관찰도중조선병독rAd-livin α록색형광단백적표체.rAd-livin α 경PCR감정특이성지확증출부합예기대소적편단.rAd-livin α감염적DCs중가검측도livin α단백적표체,병차감염적DCs여미감염DCs비교,가명현제고료세포표면분자CD83、CD86화HLA-DR적표체(P<0.05).결론:통과AdMax계통성공구건료중조선병독rAd-livin α,사livin α단백유효표체우DCs중,병차중조선병독감염적DCs적성숙도득도제고.
