山东医学高等专科学校学报
山東醫學高等專科學校學報
산동의학고등전과학교학보
JOURNAL OF SHANDONG MEDICAL COLLEGE
2012年
5期
321-324,封3
,共5页
刘瑞林%马永臻%张永东%马春玲
劉瑞林%馬永臻%張永東%馬春玲
류서림%마영진%장영동%마춘령
钙网蛋白%乳头瘤病毒%腺病毒表达载体%治疗性疫苗
鈣網蛋白%乳頭瘤病毒%腺病毒錶達載體%治療性疫苗
개망단백%유두류병독%선병독표체재체%치료성역묘
目的 构建表达钙网蛋白(CRT)与乳头瘤病毒16型E7基因H2P突变型(HPV16-E7H2P)融合蛋白重组腺病毒载体(Ad-CRT/HPV16-E7 H2P),为研发新型乳头瘤病毒治疗性疫苗奠定基础.方法 首先利用RT-PCR的方法扩增CRT基因,并进一步构建CRT与HPV16-E7H2P基因融合重组的pJW4303表达载体,将目的基因加上特定的CACC接头后克隆入载体pENTR/D-TOPO以获得入门克隆.经过入门克隆与表达载体(pAd-CMV/V5-DEST)间的重组反应获得表达克隆Ad-CRT/HPV16-E7 H2P.表达克隆线性化后转染HEK293A包装细胞,得到重组腺病毒.结果 构建的Ad-CRT/HPV16-E7H2P经PCR和测序鉴定构建正确；转染HEK293A细胞并扩增后获得的病毒滴度为1.95 × 1011 pfu/mL,该重组病毒载体能正确表达CRT/HPV16-E7H2P融合蛋白.结论 成功构建了Ad-CRT/HPV16-E7H2P,为HPV慢性感染以及宫颈癌的防治奠定了基础
目的 構建錶達鈣網蛋白(CRT)與乳頭瘤病毒16型E7基因H2P突變型(HPV16-E7H2P)融閤蛋白重組腺病毒載體(Ad-CRT/HPV16-E7 H2P),為研髮新型乳頭瘤病毒治療性疫苗奠定基礎.方法 首先利用RT-PCR的方法擴增CRT基因,併進一步構建CRT與HPV16-E7H2P基因融閤重組的pJW4303錶達載體,將目的基因加上特定的CACC接頭後剋隆入載體pENTR/D-TOPO以穫得入門剋隆.經過入門剋隆與錶達載體(pAd-CMV/V5-DEST)間的重組反應穫得錶達剋隆Ad-CRT/HPV16-E7 H2P.錶達剋隆線性化後轉染HEK293A包裝細胞,得到重組腺病毒.結果 構建的Ad-CRT/HPV16-E7H2P經PCR和測序鑒定構建正確；轉染HEK293A細胞併擴增後穫得的病毒滴度為1.95 × 1011 pfu/mL,該重組病毒載體能正確錶達CRT/HPV16-E7H2P融閤蛋白.結論 成功構建瞭Ad-CRT/HPV16-E7H2P,為HPV慢性感染以及宮頸癌的防治奠定瞭基礎
목적 구건표체개망단백(CRT)여유두류병독16형E7기인H2P돌변형(HPV16-E7H2P)융합단백중조선병독재체(Ad-CRT/HPV16-E7 H2P),위연발신형유두류병독치료성역묘전정기출.방법 수선이용RT-PCR적방법확증CRT기인,병진일보구건CRT여HPV16-E7H2P기인융합중조적pJW4303표체재체,장목적기인가상특정적CACC접두후극륭입재체pENTR/D-TOPO이획득입문극륭.경과입문극륭여표체재체(pAd-CMV/V5-DEST)간적중조반응획득표체극륭Ad-CRT/HPV16-E7 H2P.표체극륭선성화후전염HEK293A포장세포,득도중조선병독.결과 구건적Ad-CRT/HPV16-E7H2P경PCR화측서감정구건정학；전염HEK293A세포병확증후획득적병독적도위1.95 × 1011 pfu/mL,해중조병독재체능정학표체CRT/HPV16-E7H2P융합단백.결론 성공구건료Ad-CRT/HPV16-E7H2P,위HPV만성감염이급궁경암적방치전정료기출
