中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2012年
7期
580-584
,共5页
罗庆%陈聪%迭小红%田雯%康权
囉慶%陳聰%迭小紅%田雯%康權
라경%진총%질소홍%전문%강권
双表达BMP9、7载体%重组腺病毒%载体构建%成骨
雙錶達BMP9、7載體%重組腺病毒%載體構建%成骨
쌍표체BMP9、7재체%중조선병독%재체구건%성골
目的 构建双表达骨形态发生蛋白(BMP)9、7腺病毒重组体并进行初步成骨鉴定.方法 自单一表达的BMP9或BMP7 AdEasy质粒上扩增BMP9和BMP7基因序列,先后定向亚克隆至同一穿梭质粒pASG2,获得双表达穿梭质pASG2-BMP9、7.酶切、PCR鉴定及测序正确后与骨架质粒pAdEasy-1同源重组获得双表达BMP9、BMP7腺病毒质粒,转染至HEK293细胞中包装和扩增得到高滴度双表达BMP9、BMP7腺病毒,体外转染C3H10细胞,碱性磷酸酶染色及钙茜素红染色检测其早晚期成骨作用.结果 成功构建双表达BMP9、BMP7的腺病毒,RT-PCR证实双表达腺病毒在C3H10细胞中表达,其转染的C3H10细胞早期碱性磷酸酶染色及晚期钙茜素红染色活性较单一表达的BMP7或BMP9腺病毒组增强.结论 成功构建双表达BMP9、BMP7的重组腺病毒载体,其重组体具有定向诱导C3H10细胞成骨分化的能力.
目的 構建雙錶達骨形態髮生蛋白(BMP)9、7腺病毒重組體併進行初步成骨鑒定.方法 自單一錶達的BMP9或BMP7 AdEasy質粒上擴增BMP9和BMP7基因序列,先後定嚮亞剋隆至同一穿梭質粒pASG2,穫得雙錶達穿梭質pASG2-BMP9、7.酶切、PCR鑒定及測序正確後與骨架質粒pAdEasy-1同源重組穫得雙錶達BMP9、BMP7腺病毒質粒,轉染至HEK293細胞中包裝和擴增得到高滴度雙錶達BMP9、BMP7腺病毒,體外轉染C3H10細胞,堿性燐痠酶染色及鈣茜素紅染色檢測其早晚期成骨作用.結果 成功構建雙錶達BMP9、BMP7的腺病毒,RT-PCR證實雙錶達腺病毒在C3H10細胞中錶達,其轉染的C3H10細胞早期堿性燐痠酶染色及晚期鈣茜素紅染色活性較單一錶達的BMP7或BMP9腺病毒組增彊.結論 成功構建雙錶達BMP9、BMP7的重組腺病毒載體,其重組體具有定嚮誘導C3H10細胞成骨分化的能力.
목적 구건쌍표체골형태발생단백(BMP)9、7선병독중조체병진행초보성골감정.방법 자단일표체적BMP9혹BMP7 AdEasy질립상확증BMP9화BMP7기인서렬,선후정향아극륭지동일천사질립pASG2,획득쌍표체천사질pASG2-BMP9、7.매절、PCR감정급측서정학후여골가질립pAdEasy-1동원중조획득쌍표체BMP9、BMP7선병독질립,전염지HEK293세포중포장화확증득도고적도쌍표체BMP9、BMP7선병독,체외전염C3H10세포,감성린산매염색급개천소홍염색검측기조만기성골작용.결과 성공구건쌍표체BMP9、BMP7적선병독,RT-PCR증실쌍표체선병독재C3H10세포중표체,기전염적C3H10세포조기감성린산매염색급만기개천소홍염색활성교단일표체적BMP7혹BMP9선병독조증강.결론 성공구건쌍표체BMP9、BMP7적중조선병독재체,기중조체구유정향유도C3H10세포성골분화적능력.
