微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2007年
1期
54-58
,共5页
Trametes sp.420%真菌漆酶%异源表达%染料脱色
Trametes sp.420%真菌漆酶%異源錶達%染料脫色
Trametes sp.420%진균칠매%이원표체%염료탈색
根据漆酶铜结合保守区氨基酸序列设计简并引物,从新型漆酶合成菌株栓菌420(Trametes sp.420)基因组DNA扩增得到一新的漆酶同工酶基因(lacC)片段,应用长距离反向PCR技术获得其两端侧翼序列.克隆得到的lacC序列长3640bp,包括长2263bp的开放读码框及5'和3'-非编码区.lacC cDNA序列长1560bp,编码一519aa的多肽.推导的LacC蛋白序列内部存在有10个潜在的N-糖基化位点和4个铜原子结合区.将不含自身信号序列的lacC cDNA以pPIC9载体为媒介克隆到表达载体pPIC9K上,转化毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115细胞.重组菌在含有0.3mmol/L CuSO4和0.8%丙氨酸的BMM培养基中20℃培养9d,重组漆酶(rLacC)产量达到1.62×104U/L.用发酵粗酶液对终浓度50mg/L的染料进行脱色实验,结果表明,6U/L的rLacC对测试的三甲基类和偶氮类染料具有良好的脱色作用,小分子介体ABTS和HBT能够提高rLacC对染料的脱色效率和脱色速度.
根據漆酶銅結閤保守區氨基痠序列設計簡併引物,從新型漆酶閤成菌株栓菌420(Trametes sp.420)基因組DNA擴增得到一新的漆酶同工酶基因(lacC)片段,應用長距離反嚮PCR技術穫得其兩耑側翼序列.剋隆得到的lacC序列長3640bp,包括長2263bp的開放讀碼框及5'和3'-非編碼區.lacC cDNA序列長1560bp,編碼一519aa的多肽.推導的LacC蛋白序列內部存在有10箇潛在的N-糖基化位點和4箇銅原子結閤區.將不含自身信號序列的lacC cDNA以pPIC9載體為媒介剋隆到錶達載體pPIC9K上,轉化畢赤酵母(Pichia pastoris)GS115細胞.重組菌在含有0.3mmol/L CuSO4和0.8%丙氨痠的BMM培養基中20℃培養9d,重組漆酶(rLacC)產量達到1.62×104U/L.用髮酵粗酶液對終濃度50mg/L的染料進行脫色實驗,結果錶明,6U/L的rLacC對測試的三甲基類和偶氮類染料具有良好的脫色作用,小分子介體ABTS和HBT能夠提高rLacC對染料的脫色效率和脫色速度.
근거칠매동결합보수구안기산서렬설계간병인물,종신형칠매합성균주전균420(Trametes sp.420)기인조DNA확증득도일신적칠매동공매기인(lacC)편단,응용장거리반향PCR기술획득기량단측익서렬.극륭득도적lacC서렬장3640bp,포괄장2263bp적개방독마광급5'화3'-비편마구.lacC cDNA서렬장1560bp,편마일519aa적다태.추도적LacC단백서렬내부존재유10개잠재적N-당기화위점화4개동원자결합구.장불함자신신호서렬적lacC cDNA이pPIC9재체위매개극륭도표체재체pPIC9K상,전화필적효모(Pichia pastoris)GS115세포.중조균재함유0.3mmol/L CuSO4화0.8%병안산적BMM배양기중20℃배양9d,중조칠매(rLacC)산량체도1.62×104U/L.용발효조매액대종농도50mg/L적염료진행탈색실험,결과표명,6U/L적rLacC대측시적삼갑기류화우담류염료구유량호적탈색작용,소분자개체ABTS화HBT능구제고rLacC대염료적탈색효솔화탈색속도.
