中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2008年
8期
654-657
,共4页
陈哲文%JIN Yu-lan%黄海武%俞宏杰%王灿珍%瞿爱东
陳哲文%JIN Yu-lan%黃海武%俞宏傑%王燦珍%瞿愛東
진철문%JIN Yu-lan%황해무%유굉걸%왕찬진%구애동
水痘-带状疱疹病毒%糖蛋白E%CHO细胞%表达
水痘-帶狀皰疹病毒%糖蛋白E%CHO細胞%錶達
수두-대상포진병독%당단백E%CHO세포%표체
目的 在CHO细胞中稳定表达水痘一带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白E(gE).方法 PCR扩增VZV gE完整胞外结构域编码基因,克隆至哺乳动物细胞表达质粒PSGHVO中,与DHFR选择性基因和脂质体共转染CHO/dhfr-细胞,筛选稳定分泌人生长激素(hGH)和gE融合蛋白的细胞株.采用ELISA和Western blot方法检测细胞培养上清中hGH和gE融合蛋白的表达,并用Ni2+-NTA柱进行纯化.结果 gE基因PCR扩增产物和重组表达质粒PSGHVO-gE的双酶切产物经琼脂糖凝胶电泳,均可见1 500 bp的目的 基因条带.转染PSGHVO-gE质粒和DHFR基因的细胞培养上清液经ELISA和Western blot,确认有重组蛋白表达,gE表达量约为20 mg/L;纯化后蛋白纯度约为90%.结论 已在CHO细胞中稳定表达了VZV gE蛋白,为制备VZV表面抗原奠定了基础.
目的 在CHO細胞中穩定錶達水痘一帶狀皰疹病毒(VZV)糖蛋白E(gE).方法 PCR擴增VZV gE完整胞外結構域編碼基因,剋隆至哺乳動物細胞錶達質粒PSGHVO中,與DHFR選擇性基因和脂質體共轉染CHO/dhfr-細胞,篩選穩定分泌人生長激素(hGH)和gE融閤蛋白的細胞株.採用ELISA和Western blot方法檢測細胞培養上清中hGH和gE融閤蛋白的錶達,併用Ni2+-NTA柱進行純化.結果 gE基因PCR擴增產物和重組錶達質粒PSGHVO-gE的雙酶切產物經瓊脂糖凝膠電泳,均可見1 500 bp的目的 基因條帶.轉染PSGHVO-gE質粒和DHFR基因的細胞培養上清液經ELISA和Western blot,確認有重組蛋白錶達,gE錶達量約為20 mg/L;純化後蛋白純度約為90%.結論 已在CHO細胞中穩定錶達瞭VZV gE蛋白,為製備VZV錶麵抗原奠定瞭基礎.
목적 재CHO세포중은정표체수두일대상포진병독(VZV)당단백E(gE).방법 PCR확증VZV gE완정포외결구역편마기인,극륭지포유동물세포표체질립PSGHVO중,여DHFR선택성기인화지질체공전염CHO/dhfr-세포,사선은정분비인생장격소(hGH)화gE융합단백적세포주.채용ELISA화Western blot방법검측세포배양상청중hGH화gE융합단백적표체,병용Ni2+-NTA주진행순화.결과 gE기인PCR확증산물화중조표체질립PSGHVO-gE적쌍매절산물경경지당응효전영,균가견1 500 bp적목적 기인조대.전염PSGHVO-gE질립화DHFR기인적세포배양상청액경ELISA화Western blot,학인유중조단백표체,gE표체량약위20 mg/L;순화후단백순도약위90%.결론 이재CHO세포중은정표체료VZV gE단백,위제비VZV표면항원전정료기출.
