现代检验医学杂志
現代檢驗醫學雜誌
현대검험의학잡지
JOURNAL OF MODERN LABORATORY MEDICINE
2009年
1期
37-39
,共3页
杨湘越%兰小鹏%徐秀云%张惠菊
楊湘越%蘭小鵬%徐秀雲%張惠菊
양상월%란소붕%서수운%장혜국
舍格伦综合征A抗原%分泌表达%巴斯德毕赤酵母%斑点免疫金渗滤法
捨格倫綜閤徵A抗原%分泌錶達%巴斯德畢赤酵母%斑點免疫金滲濾法
사격륜종합정A항원%분비표체%파사덕필적효모%반점면역금삼려법
目的 在巴斯德毕赤酵母中表达舍格伦综舍征A抗原(SSA60)并建立肢体金快速检测方法.方法 表达质粒pPIC9k-SSA60用电穿孔法转化酵母菌SMDI168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和斑点免疫金渗滤法(DIGFA)鉴定.结果 表达产物SSA60的分子量约60 000,高拷贝巴斯德毕赤酵母转化菌的表达水平明显高于低拷贝的,表达量占分泌总蛋白60%以上,产物浓度为600～950 mg/L.DIGFA检测85份舍格伦综合征(SS)患者血清和30份正常人血清,抗SSA检测阳性率为95.3%(81/85),特异度为100%(30/30).与德国欧蒙ENA酶斑点法对比检测的符合率为96.5%(111/115),差异无统计学意义(P>0.05).结论 SSA60在巴斯德毕赤酵母中获得高效分泌表达,DIGFA简便、快速、准确,可用于临床自身免疫病的诊断.
目的 在巴斯德畢赤酵母中錶達捨格倫綜捨徵A抗原(SSA60)併建立肢體金快速檢測方法.方法 錶達質粒pPIC9k-SSA60用電穿孔法轉化酵母菌SMDI168,在MD平闆上篩選重組剋隆,用G418快速篩選高拷貝轉化子,暘性剋隆經甲醇誘導錶達後,培養上清用十二烷基硫痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和斑點免疫金滲濾法(DIGFA)鑒定.結果 錶達產物SSA60的分子量約60 000,高拷貝巴斯德畢赤酵母轉化菌的錶達水平明顯高于低拷貝的,錶達量佔分泌總蛋白60%以上,產物濃度為600～950 mg/L.DIGFA檢測85份捨格倫綜閤徵(SS)患者血清和30份正常人血清,抗SSA檢測暘性率為95.3%(81/85),特異度為100%(30/30).與德國歐矇ENA酶斑點法對比檢測的符閤率為96.5%(111/115),差異無統計學意義(P>0.05).結論 SSA60在巴斯德畢赤酵母中穫得高效分泌錶達,DIGFA簡便、快速、準確,可用于臨床自身免疫病的診斷.
목적 재파사덕필적효모중표체사격륜종사정A항원(SSA60)병건립지체금쾌속검측방법.방법 표체질립pPIC9k-SSA60용전천공법전화효모균SMDI168,재MD평판상사선중조극륭,용G418쾌속사선고고패전화자,양성극륭경갑순유도표체후,배양상청용십이완기류산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)화반점면역금삼려법(DIGFA)감정.결과 표체산물SSA60적분자량약60 000,고고패파사덕필적효모전화균적표체수평명현고우저고패적,표체량점분비총단백60%이상,산물농도위600～950 mg/L.DIGFA검측85빈사격륜종합정(SS)환자혈청화30빈정상인혈청,항SSA검측양성솔위95.3%(81/85),특이도위100%(30/30).여덕국구몽ENA매반점법대비검측적부합솔위96.5%(111/115),차이무통계학의의(P>0.05).결론 SSA60재파사덕필적효모중획득고효분비표체,DIGFA간편、쾌속、준학,가용우림상자신면역병적진단.
