中国水产科学
中國水產科學
중국수산과학
Journal of Fishery Sciences of China
2010年
4期
745-752
,共8页
孙婧%孙铂光%贾爱荣%张晓华
孫婧%孫鉑光%賈愛榮%張曉華
손청%손박광%가애영%장효화
坎氏弧菌%溶血素%TLH%表达%蛋白纯化%溶血活性
坎氏弧菌%溶血素%TLH%錶達%蛋白純化%溶血活性
감씨호균%용혈소%TLH%표체%단백순화%용혈활성
坎氏弧菌(Vibrio campbellii)是水产养殖动物的重要致病茵.本研究构建了坎氏弧菌热不稳定溶血素(TLH)基因的重组表达质粒pET2610(+)/tlh,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达带有6个组氨酸的TLH融合蛋白,然后利用Ni琼脂糖亲和层析柱进行纯化.SDS-PAGE分析显示,该溶血素能够大量表达,分子量约为42 kD.纯化的TLH(0.41mg/mL)具有较强的溶血活性(溶血圈直径为16 mm)及磷脂酶活性(晕圈直径为15 mm).其溶血活力的最适温度为37℃,在75℃下培养30 min即丧失活力;最适pH为6,pH大于或小于6时都会导致其稳定性下降;一价金属离子如Na+、K+对溶血活性几乎没有影响,而部分二价金属离子如Ca2+、Co2+会导致溶血活性降低.本研究结果对阐明坎氏弧菌的致病机理及基因工程疫苗开发有重要意义.
坎氏弧菌(Vibrio campbellii)是水產養殖動物的重要緻病茵.本研究構建瞭坎氏弧菌熱不穩定溶血素(TLH)基因的重組錶達質粒pET2610(+)/tlh,併轉入大腸桿菌BL21(DE3)中誘導錶達帶有6箇組氨痠的TLH融閤蛋白,然後利用Ni瓊脂糖親和層析柱進行純化.SDS-PAGE分析顯示,該溶血素能夠大量錶達,分子量約為42 kD.純化的TLH(0.41mg/mL)具有較彊的溶血活性(溶血圈直徑為16 mm)及燐脂酶活性(暈圈直徑為15 mm).其溶血活力的最適溫度為37℃,在75℃下培養30 min即喪失活力;最適pH為6,pH大于或小于6時都會導緻其穩定性下降;一價金屬離子如Na+、K+對溶血活性幾乎沒有影響,而部分二價金屬離子如Ca2+、Co2+會導緻溶血活性降低.本研究結果對闡明坎氏弧菌的緻病機理及基因工程疫苗開髮有重要意義.
감씨호균(Vibrio campbellii)시수산양식동물적중요치병인.본연구구건료감씨호균열불은정용혈소(TLH)기인적중조표체질립pET2610(+)/tlh,병전입대장간균BL21(DE3)중유도표체대유6개조안산적TLH융합단백,연후이용Ni경지당친화층석주진행순화.SDS-PAGE분석현시,해용혈소능구대량표체,분자량약위42 kD.순화적TLH(0.41mg/mL)구유교강적용혈활성(용혈권직경위16 mm)급린지매활성(훈권직경위15 mm).기용혈활력적최괄온도위37℃,재75℃하배양30 min즉상실활력;최괄pH위6,pH대우혹소우6시도회도치기은정성하강;일개금속리자여Na+、K+대용혈활성궤호몰유영향,이부분이개금속리자여Ca2+、Co2+회도치용혈활성강저.본연구결과대천명감씨호균적치병궤리급기인공정역묘개발유중요의의.
