CAJ | 학술논문

目的:建立人少突胶质细胞糖蛋白细胞外Ig样结构域(MOGIgd)的硫氧还蛋白(TrxA)融合表达系统,探讨表达产物MOGIgd- TrxA融合蛋白的免疫原性.方法:(1)应用RT-PCR方法,以人脑组织的总RNA为模板扩增出编码MOGIgd的cDNA序列,将MOGIgd cDNA克隆到TrxA融合表达载体pET32a(+)中,重组质粒pET32a-MOGIgd经表型筛选、酶切鉴定及测序鉴定后,转化至BL21(DEB)trxB-宿主菌中经异丙硫代钠-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并通过金属鳌合亲和层析柱进行纯化.(2)C57BL/6小鼠分为MOGIgd- TrxA组(MOG组)、硫氧还蛋白组(TrxA组)及正常对照组(NC组),12只/组,各组以相应抗原乳剂免疫小鼠制作实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型后观察其临床神经功能和组织病理学改变(HE染色和髓鞘Luxol fast blue染色)评价模型质量.结果:(1)成功获取高产量32 kD MOGIgd- TrxA融合蛋白,以包涵体形式表达,纯化后纯度达95%左右.(2)MOG组小鼠75%(9/12)发病,于免疫后第(12.14±2.04)d发病,呈慢性非缓解型病程;发病动物组织切片HE染色和髓鞘染色显示不同程度炎性细胞浸润和髓鞘脱失.结论:成功建立人MOGIgd的TrxA融合表达系统,表达产物MOGIgd-TrxA融合蛋白可作为免疫原诱导EAE动物模型.
목적:건립인소돌효질세포당단백세포외Ig양결구역(MOGIgd)적류양환단백(TrxA)융합표체계통,탐토표체산물MOGIgd- TrxA융합단백적면역원성.방법:(1)응용RT-PCR방법,이인뇌조직적총RNA위모판확증출편마MOGIgd적cDNA서렬,장MOGIgd cDNA극륭도TrxA융합표체재체pET32a(+)중,중조질립pET32a-MOGIgd경표형사선、매절감정급측서감정후,전화지BL21(DEB)trxB-숙주균중경이병류대납-β-D-반유당감(IPTG)유도표체,병통과금속오합친화층석주진행순화.(2)C57BL/6소서분위MOGIgd- TrxA조(MOG조)、류양환단백조(TrxA조)급정상대조조(NC조),12지/조,각조이상응항원유제면역소서제작실험성자신면역성뇌척수염(EAE)모형후관찰기림상신경공능화조직병이학개변(HE염색화수초Luxol fast blue염색)평개모형질량.결과:(1)성공획취고산량32 kD MOGIgd- TrxA융합단백,이포함체형식표체,순화후순도체95%좌우.(2)MOG조소서75%(9/12)발병,우면역후제(12.14±2.04)d발병,정만성비완해형병정;발병동물조직절편HE염색화수초염색현시불동정도염성세포침윤화수초탈실.결론:성공건립인MOGIgd적TrxA융합표체계통,표체산물MOGIgd-TrxA융합단백가작위면역원유도EAE동물모형.