时珍国医国药
時珍國醫國藥
시진국의국약
LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH
2011年
8期
1871-1874
,共4页
刘婷婷%卫东锋%赵春燕%苏刚%吴剑华%卢艳%曹慧明%程卫东
劉婷婷%衛東鋒%趙春燕%囌剛%吳劍華%盧豔%曹慧明%程衛東
류정정%위동봉%조춘연%소강%오검화%로염%조혜명%정위동
K562细胞%双向电泳%三氯乙酸/丙酮沉淀%丙酮沉淀%墓头回
K562細胞%雙嚮電泳%三氯乙痠/丙酮沉澱%丙酮沉澱%墓頭迴
K562세포%쌍향전영%삼록을산/병동침정%병동침정%묘두회
目的 建立适用于体外培养的K562细胞总蛋白的双向电泳图谱,提高电泳分辨率和重复性,以进一步了解中药墓头回作用于白血病细胞的新机制.方法 采用标准裂解法提取K562细胞总蛋白,后续进行丙酮沉淀和三氯乙酸/丙酮沉淀,分别比较一步裂解法所得蛋白和丙酮沉淀法、三氯乙酸/丙酮沉淀法所得蛋白的双向电泳图谱,优选最佳的样品制备方法.此外在等电聚焦时,聚焦电压在传统聚焦条件上进行优化.结果 丙酮沉淀法不仅能减少蛋白降解,而且增加蛋白的溶解性,因此丙酮沉淀法所得蛋白的双向电泳图谱显示出更好的溶解性和重复性,在聚焦条件上对传统聚焦条件的优化使横向和纵向拖尾有明显改善,所得图谱蛋白点更清晰,分离更完全,能获得分辨率较高的双向电泳图谱.结论 在标准裂解液提取蛋白基础上结合丙酮沉淀法更适于制备K562细胞的双向电泳样品,等电聚焦(IEF)电泳时适当延长除盐时间能更有效的分离K562细胞全蛋白,而且后续实验证明此方法同样成功建立了墓头回作用白血病K562细胞蛋白和肿瘤组织蛋白2 - DE图谱.
目的 建立適用于體外培養的K562細胞總蛋白的雙嚮電泳圖譜,提高電泳分辨率和重複性,以進一步瞭解中藥墓頭迴作用于白血病細胞的新機製.方法 採用標準裂解法提取K562細胞總蛋白,後續進行丙酮沉澱和三氯乙痠/丙酮沉澱,分彆比較一步裂解法所得蛋白和丙酮沉澱法、三氯乙痠/丙酮沉澱法所得蛋白的雙嚮電泳圖譜,優選最佳的樣品製備方法.此外在等電聚焦時,聚焦電壓在傳統聚焦條件上進行優化.結果 丙酮沉澱法不僅能減少蛋白降解,而且增加蛋白的溶解性,因此丙酮沉澱法所得蛋白的雙嚮電泳圖譜顯示齣更好的溶解性和重複性,在聚焦條件上對傳統聚焦條件的優化使橫嚮和縱嚮拖尾有明顯改善,所得圖譜蛋白點更清晰,分離更完全,能穫得分辨率較高的雙嚮電泳圖譜.結論 在標準裂解液提取蛋白基礎上結閤丙酮沉澱法更適于製備K562細胞的雙嚮電泳樣品,等電聚焦(IEF)電泳時適噹延長除鹽時間能更有效的分離K562細胞全蛋白,而且後續實驗證明此方法同樣成功建立瞭墓頭迴作用白血病K562細胞蛋白和腫瘤組織蛋白2 - DE圖譜.
목적 건립괄용우체외배양적K562세포총단백적쌍향전영도보,제고전영분변솔화중복성,이진일보료해중약묘두회작용우백혈병세포적신궤제.방법 채용표준렬해법제취K562세포총단백,후속진행병동침정화삼록을산/병동침정,분별비교일보렬해법소득단백화병동침정법、삼록을산/병동침정법소득단백적쌍향전영도보,우선최가적양품제비방법.차외재등전취초시,취초전압재전통취초조건상진행우화.결과 병동침정법불부능감소단백강해,이차증가단백적용해성,인차병동침정법소득단백적쌍향전영도보현시출경호적용해성화중복성,재취초조건상대전통취초조건적우화사횡향화종향타미유명현개선,소득도보단백점경청석,분리경완전,능획득분변솔교고적쌍향전영도보.결론 재표준렬해액제취단백기출상결합병동침정법경괄우제비K562세포적쌍향전영양품,등전취초(IEF)전영시괄당연장제염시간능경유효적분리K562세포전단백,이차후속실험증명차방법동양성공건립료묘두회작용백혈병K562세포단백화종류조직단백2 - DE도보.
