中国医学科学院学报
中國醫學科學院學報
중국의학과학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE
2011年
6期
638-643
,共6页
刘光%杨瑞锋%石秉炀%刘德培
劉光%楊瑞鋒%石秉煬%劉德培
류광%양서봉%석병양%류덕배
线粒体转录因子A%线粒体转录因子B1%线粒体转录因子B2%融合蛋白%纯化
線粒體轉錄因子A%線粒體轉錄因子B1%線粒體轉錄因子B2%融閤蛋白%純化
선립체전록인자A%선립체전록인자B1%선립체전록인자B2%융합단백%순화
目的 获取人线粒体转录因子A(TFAM)、线粒体转录因子B1(TFB1M)、线粒体转录因子B2(TFB2M)基因片段,高效表达和纯化带有谷胱甘肽转移酶(GST)标签的GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M融合蛋白.方法 设计引物扩增得到TFAM、TFB1M、TFB2M的cDNA片段,通过引入的酶切位点克隆至表达载体pET42a,构建重组表达载体,并导入E.coli BL21宿主菌中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组的GST融合蛋白,谷胱甘肽琼脂糖珠纯化表达产物,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行分析鉴定.结果 获得pET42a-TFAM、pET42a-TFB1M、pET42a-TFB2M表达质粒,测序结果与GenBank的基因序列一致.SDS-PAGE分析结果显示,重组GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M融合蛋白分别在相对分子质量56000、67000、69000处出现特异性蛋白条带,经GST亲和层析纯化后,得到高纯度的融合蛋白.结论 成功构建了基因重组体pET42a-TFAM、pET42a-TFB1M、pET42a-TFB2M,制备了GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M融合蛋白.
目的 穫取人線粒體轉錄因子A(TFAM)、線粒體轉錄因子B1(TFB1M)、線粒體轉錄因子B2(TFB2M)基因片段,高效錶達和純化帶有穀胱甘肽轉移酶(GST)標籤的GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M融閤蛋白.方法 設計引物擴增得到TFAM、TFB1M、TFB2M的cDNA片段,通過引入的酶切位點剋隆至錶達載體pET42a,構建重組錶達載體,併導入E.coli BL21宿主菌中,異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達重組的GST融閤蛋白,穀胱甘肽瓊脂糖珠純化錶達產物,十二烷基磺痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)進行分析鑒定.結果 穫得pET42a-TFAM、pET42a-TFB1M、pET42a-TFB2M錶達質粒,測序結果與GenBank的基因序列一緻.SDS-PAGE分析結果顯示,重組GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M融閤蛋白分彆在相對分子質量56000、67000、69000處齣現特異性蛋白條帶,經GST親和層析純化後,得到高純度的融閤蛋白.結論 成功構建瞭基因重組體pET42a-TFAM、pET42a-TFB1M、pET42a-TFB2M,製備瞭GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M融閤蛋白.
목적 획취인선립체전록인자A(TFAM)、선립체전록인자B1(TFB1M)、선립체전록인자B2(TFB2M)기인편단,고효표체화순화대유곡광감태전이매(GST)표첨적GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M융합단백.방법 설계인물확증득도TFAM、TFB1M、TFB2M적cDNA편단,통과인입적매절위점극륭지표체재체pET42a,구건중조표체재체,병도입E.coli BL21숙주균중,이병기류대반유당감(IPTG)유도표체중조적GST융합단백,곡광감태경지당주순화표체산물,십이완기광산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)진행분석감정.결과 획득pET42a-TFAM、pET42a-TFB1M、pET42a-TFB2M표체질립,측서결과여GenBank적기인서렬일치.SDS-PAGE분석결과현시,중조GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M융합단백분별재상대분자질량56000、67000、69000처출현특이성단백조대,경GST친화층석순화후,득도고순도적융합단백.결론 성공구건료기인중조체pET42a-TFAM、pET42a-TFB1M、pET42a-TFB2M,제비료GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M융합단백.
