中华器官移植杂志
中華器官移植雜誌
중화기관이식잡지
CHINESE JOURNAL OF ORGAN TRANSPLANTATION
2007年
5期
303-307
,共5页
张志宏%马腾骧%王广有%李胜芝%张月%刘思金%劳为德%李光三
張誌宏%馬騰驤%王廣有%李勝芝%張月%劉思金%勞為德%李光三
장지굉%마등양%왕엄유%리성지%장월%류사금%로위덕%리광삼
转基因%小鼠%抗体,异嗜性%心室功能,左%内皮细胞%补体
轉基因%小鼠%抗體,異嗜性%心室功能,左%內皮細胞%補體
전기인%소서%항체,이기성%심실공능,좌%내피세포%보체
目的 探讨联合转人衰变加速因子(DAF)和CD59基因对小鼠心脏在人血清灌注下做功及组织结构的影响. 方法 采用受精卵显微注射技术,将人DAF和CD59基因注入昆明小鼠受精卵的原核中,选取注射后仍健康的受精卯植入假孕母鼠的输卵管中待分娩.提取足月产小鼠(G0代)基因组DNA,以聚合酶链反应(PCR)及Southern印迹杂交确定外源基因整合情况,应用流式细胞术检测人DAF和CD59在转基因小鼠白细胞上的表达,免疫组织化学染色检测人DAF和CD59在转基因小鼠心脏、肝脏及肾脏组织中的表达.取出转基因成功小鼠的心脏,在体外以人血清进行灌注,测定其做功能力,HE染色及免疫组化染色观察灌注后心脏的组织学变化以及补体C3c的沉积情况.以单一转DAF基因的小鼠为对照. 结果 共获得G0代小鼠135只,经PCR及Southern印迹杂交分析,11只(8.1%,11/135)整合有人DAF和CD59外源基因,其中6只的白细胞膜表面人DAF和CD59表达阳性,强度分别为(86±6)%和(85±8)%,单转人DAF基因者(87±7)%,差异无统计学意义.人DAF及CD59仅表达于转基因小鼠心脏、肝脏及肾脏组织中的血管内皮细胞上.在人血清灌注后60 min内,普通小鼠的心脏做功急剧下降,接近40 min时心脏停止搏动;转DAF基因小鼠的心脏做功也下降,但仍维持在最大值的20%以上;转DAF和CD59双基因小鼠的心脏做功维持在最大值的40%以上.在人血清灌注的10～60 min,转基因小鼠心脏做功能力明显强于普通小鼠心脏(P＜0.05);灌注20～60 min时,转双基因小鼠的心脏做功能力明显强于转DAF基因小鼠心脏(P＜0.05).普通小鼠心脏在人血清灌注后组织裂解较多见,肿胀严重,而转基因小鼠心脏组织的病理改变明显轻于普通小鼠,转双基因者的病理变化又明显轻于单一转DAF者,心肌血管中人C3c的沉积也明显少于单一转DAF者. 结论 血管内皮细胞特异性表达人DAF和CD59,可明显阻抑其心脏在异种血清灌注下的做功能力下降及C3c在血管中的沉积,这可能对抵御超急性排斥反应有一定帮助.
目的 探討聯閤轉人衰變加速因子(DAF)和CD59基因對小鼠心髒在人血清灌註下做功及組織結構的影響. 方法 採用受精卵顯微註射技術,將人DAF和CD59基因註入昆明小鼠受精卵的原覈中,選取註射後仍健康的受精卯植入假孕母鼠的輸卵管中待分娩.提取足月產小鼠(G0代)基因組DNA,以聚閤酶鏈反應(PCR)及Southern印跡雜交確定外源基因整閤情況,應用流式細胞術檢測人DAF和CD59在轉基因小鼠白細胞上的錶達,免疫組織化學染色檢測人DAF和CD59在轉基因小鼠心髒、肝髒及腎髒組織中的錶達.取齣轉基因成功小鼠的心髒,在體外以人血清進行灌註,測定其做功能力,HE染色及免疫組化染色觀察灌註後心髒的組織學變化以及補體C3c的沉積情況.以單一轉DAF基因的小鼠為對照. 結果 共穫得G0代小鼠135隻,經PCR及Southern印跡雜交分析,11隻(8.1%,11/135)整閤有人DAF和CD59外源基因,其中6隻的白細胞膜錶麵人DAF和CD59錶達暘性,彊度分彆為(86±6)%和(85±8)%,單轉人DAF基因者(87±7)%,差異無統計學意義.人DAF及CD59僅錶達于轉基因小鼠心髒、肝髒及腎髒組織中的血管內皮細胞上.在人血清灌註後60 min內,普通小鼠的心髒做功急劇下降,接近40 min時心髒停止搏動;轉DAF基因小鼠的心髒做功也下降,但仍維持在最大值的20%以上;轉DAF和CD59雙基因小鼠的心髒做功維持在最大值的40%以上.在人血清灌註的10～60 min,轉基因小鼠心髒做功能力明顯彊于普通小鼠心髒(P＜0.05);灌註20～60 min時,轉雙基因小鼠的心髒做功能力明顯彊于轉DAF基因小鼠心髒(P＜0.05).普通小鼠心髒在人血清灌註後組織裂解較多見,腫脹嚴重,而轉基因小鼠心髒組織的病理改變明顯輕于普通小鼠,轉雙基因者的病理變化又明顯輕于單一轉DAF者,心肌血管中人C3c的沉積也明顯少于單一轉DAF者. 結論 血管內皮細胞特異性錶達人DAF和CD59,可明顯阻抑其心髒在異種血清灌註下的做功能力下降及C3c在血管中的沉積,這可能對牴禦超急性排斥反應有一定幫助.
목적 탐토연합전인쇠변가속인자(DAF)화CD59기인대소서심장재인혈청관주하주공급조직결구적영향. 방법 채용수정란현미주사기술,장인DAF화CD59기인주입곤명소서수정란적원핵중,선취주사후잉건강적수정묘식입가잉모서적수란관중대분면.제취족월산소서(G0대)기인조DNA,이취합매련반응(PCR)급Southern인적잡교학정외원기인정합정황,응용류식세포술검측인DAF화CD59재전기인소서백세포상적표체,면역조직화학염색검측인DAF화CD59재전기인소서심장、간장급신장조직중적표체.취출전기인성공소서적심장,재체외이인혈청진행관주,측정기주공능력,HE염색급면역조화염색관찰관주후심장적조직학변화이급보체C3c적침적정황.이단일전DAF기인적소서위대조. 결과 공획득G0대소서135지,경PCR급Southern인적잡교분석,11지(8.1%,11/135)정합유인DAF화CD59외원기인,기중6지적백세포막표면인DAF화CD59표체양성,강도분별위(86±6)%화(85±8)%,단전인DAF기인자(87±7)%,차이무통계학의의.인DAF급CD59부표체우전기인소서심장、간장급신장조직중적혈관내피세포상.재인혈청관주후60 min내,보통소서적심장주공급극하강,접근40 min시심장정지박동;전DAF기인소서적심장주공야하강,단잉유지재최대치적20%이상;전DAF화CD59쌍기인소서적심장주공유지재최대치적40%이상.재인혈청관주적10～60 min,전기인소서심장주공능력명현강우보통소서심장(P＜0.05);관주20～60 min시,전쌍기인소서적심장주공능력명현강우전DAF기인소서심장(P＜0.05).보통소서심장재인혈청관주후조직렬해교다견,종창엄중,이전기인소서심장조직적병리개변명현경우보통소서,전쌍기인자적병리변화우명현경우단일전DAF자,심기혈관중인C3c적침적야명현소우단일전DAF자. 결론 혈관내피세포특이성표체인DAF화CD59,가명현조억기심장재이충혈청관주하적주공능력하강급C3c재혈관중적침적,저가능대저어초급성배척반응유일정방조.
