中山大学学报(医学科学版)
中山大學學報(醫學科學版)
중산대학학보(의학과학판)
JOURNAL OF SUN YAT-SEN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2003年
5期
421-424,428
,共5页
唐小卿%冯鉴强%周继斌%郭瑞鲜%李平阳%叶美红
唐小卿%馮鑒彊%週繼斌%郭瑞鮮%李平暘%葉美紅
당소경%풍감강%주계빈%곽서선%리평양%협미홍
逆转录表达载体%脑源性神经营养因子%淋巴细胞
逆轉錄錶達載體%腦源性神經營養因子%淋巴細胞
역전록표체재체%뇌원성신경영양인자%림파세포
[目的]构建含脑源性神经营养因子基因( brain- derived neurotrophic factor ,BDNF gene)逆转录表达载体并了解其在淋巴细胞中的表达,探讨治疗基因的非损伤性脑内转移的新途径.[方法] 用 RT- PCR方法从大鼠海马组织总 RNA中扩增 (cDNA) BDNF片段,应用基因重组技术将大鼠 (cDNA) BDNF克隆到逆转录病毒载体 pLXSN中,用限制性内切酶酶切分析和 DNA测序对重组质粒进行鉴定,采用 LipofectAMINE将重组大鼠 (cDNA) BDNF导入 PA317细胞,获取高滴度的病毒上清转染大鼠淋巴细胞,应用流式细胞仪( FCM)检测大鼠淋巴细胞 BDNF的表达,噻唑蓝 (MTT)法检测淋巴细胞培养上清对 PC12细胞增殖的影响.[结果] 扩增出大鼠 (cDNA) BDNF片段,限制性内切酶酶切和 DNA测序证实获得正确的重组质粒 pLXSN- BDNF, BDNF基因修饰的大鼠淋巴细胞能高表达 BDNF蛋白,其培养上清能促进 PC12细胞增殖.[结论] 成功构建了 BDNF基因逆转录表达载体, BDNF基因修饰的大鼠淋巴细胞能高表达和分泌具有生物活性的 BDNF蛋白,为治疗基因的非损伤性脑内转移奠定了一定基础.
[目的]構建含腦源性神經營養因子基因( brain- derived neurotrophic factor ,BDNF gene)逆轉錄錶達載體併瞭解其在淋巴細胞中的錶達,探討治療基因的非損傷性腦內轉移的新途徑.[方法] 用 RT- PCR方法從大鼠海馬組織總 RNA中擴增 (cDNA) BDNF片段,應用基因重組技術將大鼠 (cDNA) BDNF剋隆到逆轉錄病毒載體 pLXSN中,用限製性內切酶酶切分析和 DNA測序對重組質粒進行鑒定,採用 LipofectAMINE將重組大鼠 (cDNA) BDNF導入 PA317細胞,穫取高滴度的病毒上清轉染大鼠淋巴細胞,應用流式細胞儀( FCM)檢測大鼠淋巴細胞 BDNF的錶達,噻唑藍 (MTT)法檢測淋巴細胞培養上清對 PC12細胞增殖的影響.[結果] 擴增齣大鼠 (cDNA) BDNF片段,限製性內切酶酶切和 DNA測序證實穫得正確的重組質粒 pLXSN- BDNF, BDNF基因脩飾的大鼠淋巴細胞能高錶達 BDNF蛋白,其培養上清能促進 PC12細胞增殖.[結論] 成功構建瞭 BDNF基因逆轉錄錶達載體, BDNF基因脩飾的大鼠淋巴細胞能高錶達和分泌具有生物活性的 BDNF蛋白,為治療基因的非損傷性腦內轉移奠定瞭一定基礎.
[목적]구건함뇌원성신경영양인자기인( brain- derived neurotrophic factor ,BDNF gene)역전록표체재체병료해기재림파세포중적표체,탐토치료기인적비손상성뇌내전이적신도경.[방법] 용 RT- PCR방법종대서해마조직총 RNA중확증 (cDNA) BDNF편단,응용기인중조기술장대서 (cDNA) BDNF극륭도역전록병독재체 pLXSN중,용한제성내절매매절분석화 DNA측서대중조질립진행감정,채용 LipofectAMINE장중조대서 (cDNA) BDNF도입 PA317세포,획취고적도적병독상청전염대서림파세포,응용류식세포의( FCM)검측대서림파세포 BDNF적표체,새서람 (MTT)법검측림파세포배양상청대 PC12세포증식적영향.[결과] 확증출대서 (cDNA) BDNF편단,한제성내절매매절화 DNA측서증실획득정학적중조질립 pLXSN- BDNF, BDNF기인수식적대서림파세포능고표체 BDNF단백,기배양상청능촉진 PC12세포증식.[결론] 성공구건료 BDNF기인역전록표체재체, BDNF기인수식적대서림파세포능고표체화분비구유생물활성적 BDNF단백,위치료기인적비손상성뇌내전이전정료일정기출.
