生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2004年
1期
21-24
,共4页
俞慧清%李志国%刘红茹%吴国祥%成国祥
俞慧清%李誌國%劉紅茹%吳國祥%成國祥
유혜청%리지국%류홍여%오국상%성국상
山羊β-casein%打靶载体%人乳铁蛋白%C127细胞%表达
山羊β-casein%打靶載體%人乳鐵蛋白%C127細胞%錶達
산양β-casein%타파재체%인유철단백%C127세포%표체
以本地山羊基因组DNA为模板,通过长链PCR扩增出山羊β-casein上游包括启动子,外显子1及部分外显子2的6.1kb的调控序列及下游3.3kb的序列,将来自质粒pCDNA3的neo基因以及来自质粒pNEOZTK2的tk基因,经克隆重组后构建了本地山羊乳腺特异性定点打靶载体,并在其中克隆人乳铁蛋白mini基因,采用脂质体法转染小鼠乳腺上皮癌化细胞系C127,以进行打靶载体的表达功能检测,双夹心ELISA测得诱导液中乳铁蛋白表达量为0.2μg/mL,Western-blot显示重组蛋白分子量比标准品略小,约为76kD,结果说明本载体能够指导外源基因在动物乳腺细胞内正确表达.
以本地山羊基因組DNA為模闆,通過長鏈PCR擴增齣山羊β-casein上遊包括啟動子,外顯子1及部分外顯子2的6.1kb的調控序列及下遊3.3kb的序列,將來自質粒pCDNA3的neo基因以及來自質粒pNEOZTK2的tk基因,經剋隆重組後構建瞭本地山羊乳腺特異性定點打靶載體,併在其中剋隆人乳鐵蛋白mini基因,採用脂質體法轉染小鼠乳腺上皮癌化細胞繫C127,以進行打靶載體的錶達功能檢測,雙夾心ELISA測得誘導液中乳鐵蛋白錶達量為0.2μg/mL,Western-blot顯示重組蛋白分子量比標準品略小,約為76kD,結果說明本載體能夠指導外源基因在動物乳腺細胞內正確錶達.
이본지산양기인조DNA위모판,통과장련PCR확증출산양β-casein상유포괄계동자,외현자1급부분외현자2적6.1kb적조공서렬급하유3.3kb적서렬,장래자질립pCDNA3적neo기인이급래자질립pNEOZTK2적tk기인,경극륭중조후구건료본지산양유선특이성정점타파재체,병재기중극륭인유철단백mini기인,채용지질체법전염소서유선상피암화세포계C127,이진행타파재체적표체공능검측,쌍협심ELISA측득유도액중유철단백표체량위0.2μg/mL,Western-blot현시중조단백분자량비표준품략소,약위76kD,결과설명본재체능구지도외원기인재동물유선세포내정학표체.
